英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？ 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系：传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右； 针对某些原代细胞： 由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%～60%，但要确保在感染后4天时细胞 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染，为什么你的感染效率那么低？
在慢病毒感染细胞过程中，会遇到哪些问题呢？ 1.在细胞感染时， MOI是一个非常重要的指标，如何确定MOI值呢？ MOI:复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则： 1. 在细胞形 …
阅读更多 »慢病毒、腺病毒、AAV 的检测周期分别是多长？
慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后，会在1周左右开始表达，体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内，细胞的生存周期会很长，特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死，AAV基本 …
阅读更多 »慢病毒适用于哪些细胞？
慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 慢病毒有如下特点： ● 感染范围广 …
阅读更多 »腺病毒适用于哪些细胞？
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …
阅读更多 »如何选择腺病毒、慢病毒、腺相关病毒？
病毒表达系统 腺病毒(Adenovirus) 慢病毒(Lentivirus) 腺相关病毒(Adeno-As sociate virus) 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒 复制 条件复制 不可复制 条件复制 滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细 …
阅读更多 »Crispr/Cas9腺病毒构建流程
Crispr/Cas9 简介 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核 …
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