1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好? siRNA的沉默效果是有时效性的,在最佳的时间点观察,会得到更加明显的沉默效果,这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定,因为一个是消耗mRNA,一个是产生mRNA。对转染siRNA,在核酸水平,转染后8-48小时,即可观察到mRNA水平的逐步下降,一般来说,转染后48小时进行qRT-PCR …
阅读更多 »都说RNAi很容易降解,转染效率很低,是真的吗?
RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统,人工引入一段和目标RNA互补的序列,这样,在细胞内形成双链RNA,诱发降解机制,使目标RNA降解,无法被进一步翻译。 在转染过程中,有人就在担心,dsRNA的稳定性是相对于单链RNA而言的!RNA怎么办? RNAi中,标准的非修饰的siRNA确实容易降解,这不仅在保存过程中,而且在转染过程中。对siRNA的降解,可以合 …
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