2024年 11 月 24日, 星期日
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Tag Archives: 英格恩

动物体内转染常见问题与解决方案

EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。 一般情况下,核酸(μg)和EntransterTM-in vivo (μ …

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Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因?

做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生,经常有朋友反映,加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光,可亮光很快就消逝了,压完片后,条带却很弱,甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么? 要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产生荧光 …

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PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

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如何选择稳定转染的筛选抗生素?

稳定转染和瞬时转染,细胞转染的步骤基本相同,只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天,故在转染12~72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因,如,氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢? 很多真核表达质粒上都 …

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动物实验系列篇章之六——实验动物各种体液、骨髓的采集方法

一、消化液的采集 (一) 唾液 1. 直接抽取法 在急性实验中, 可用吸管直接插入动物口腔或唾液腺导管抽吸唾液,此法非常简单,但从口腔抽吸唾液会有杂质混入。 2. 制造腮腺瘘法 在慢性实验中,收集狗的唾液,要用外科手术方法将腮腺导管开口移向体外,即以腮腺导管为中心,切成一直径约2~3cm的圆形粘膜片,将此粘膜片,与周围组织分开,穿过皮肤切口引到颊外,将带有导 …

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siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA间的区别

RNA干扰(RNAi),即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默,已经迅速而广泛地应用到基因功能,基因表达调控机制研究等热门领域,并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来,这方面的科学论文及报道爆炸性增长,几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中,出现了很多与RNA干扰相关的概念,意思很相 近但并不完全相同,这里列举 …

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动物实验系列篇章之二——实验动物的编号和分组

一、编号 实验动物常需要标记以示区别。编号的方法很多,根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。 (一)挂牌法:将号码烙压在圆形或方形金属牌上(最好用铝或不锈钢的,它可长期使用不生锈),或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上,将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动物。 (二)打号法:用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上。打 …

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