英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …
阅读更多 »细胞转染应该什么时候加抗生素？
如何选择稳定转染的筛选抗生素？
稳定转染和瞬时转染，细胞转染的步骤基本相同，只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天，故在转染12～72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因，如，氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢？ 很多真核表达质粒上都 …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项，并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定？为什么磷酸钙转染并不经济？》比较感兴趣。在这里，对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解，在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享，以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这有利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
阅读更多 »EntransterTM-in vivo体内转染试剂
EntransterTM-in vivo体内转染试剂 产品介绍 EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。EntransterTM-in vivo动物体内转染试剂可将小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor或DNA转染到动 …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
看过很多细胞转染的高手，在做真核细胞转染时，都是在把核酸和转染试剂的混合液加入细胞表面以前，将融合的细胞的含血清的培养液弃去，用无血清培养基清晰后再加入混合物，4-6h后再换含血清的培养基。这是为什么呢？为什么这些转染试剂要求不含血清呢？ 传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂 …
阅读更多 »G418筛选转染克隆的注意事项
G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1. G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2. …
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