英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

细胞生物学的战友，应该对细胞转染不陌生，没做过也见别人做过。有个问题想跟大家讨论一下，就是脂质体毒性的问题。我们都知道做一次细胞转染不容易，从准备细胞到目的细胞筛选，过程相当繁琐。所以如何提高转染效率成为了关键，但是常用的脂质体转染要求无血清转染，而且有很大的细胞毒性，对转染效率和实验结果都会产生影响，那为什么脂质体转染试剂毒性这么大？ 已有众多的文献报道， …

RNA干扰 （RNAi）：近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 MicroRNA（miRNA,微RNA）： …

做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充分，封闭不 …

1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …