英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱，望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候，在开展正式实验前要多做预试验，优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

4：Western Blot化学发光(ECL)时，胶片上条带很浓怎么办？ 对ECL发光来说，可以减少发光时间和显影时间。对英格恩Enlight发光液来说，可以将压过的膜重新用TBST洗涤10min×3次后重新曝光操作。 5：Western blot化学发光(ECL)时，胶片上条带很弱怎么办？ 对ECL发光来说，可适当延长曝光时间。如果还是不行，增加蛋白的上样 …

ECL发光灵敏度越高越好吗？ A: 不是。大多数实验的蛋白浓度在pg-ng级别，用增强型的发光液就可以。比如英格恩的Enlight发光液。 2.ECL发光液为什么需要避光保存？ A:因为ECL发光液里的鲁米那等发光成分很容易因为光而失活，所以需要避光保存。 3.ECL发光液多长时间容易失效，用一瓶ECL试剂，结果有差异，是否是失效了？ A：早期的ECL发光也 …