英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …

1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜$\mathrm{悬}\mathrm{浮}\mathrm{细}\mathrm{胞}\mathrm{根}\mathrm{据}\mathrm{需}\mathrm{要}\mathrm{调}\mathrm{整}，\mathrm{不}\mathrm{要}\mathrm{采}\mathrm{用}\mathrm{过}\mathrm{高}\mathrm{的}\mathrm{细}\mathrm{胞}\mathrm{密}\mathrm{度}$。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释$\mathrm{用}\mathrm{量}\mathrm{参}\mathrm{见}\mathrm{下}\mathrm{表}$，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释$\mathrm{用}\mathrm{量}\mathrm{参}\mathrm{见}\mathrm{下}\mathrm{表}$，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …

RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效 …

1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基$\mathrm{如}，RPMI1640\mathrm{和}DMEM$。培养基的成分包括营养物质$\mathrm{氨}\mathrm{基}\mathrm{酸}，\mathrm{葡}\mathrm{萄}\mathrm{糖}$，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …