首先siRNA由于只 …
阅读更多 »动物体内转染实验效果如何检测
运用Entranster-in vivo进行体内转染后,一般根据课题研究要求进行,如果单纯检测转染效率,推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究,采用组织学和生理学,以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性,通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法,由于体内取出的组织材料背景高,检测较为困难。 &nbs …
阅读更多 »运用Entranster-in vivo进行体内转染后,一般根据课题研究要求进行,如果单纯检测转染效率,推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究,采用组织学和生理学,以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性,通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法,由于体内取出的组织材料背景高,检测较为困难。 &nbs …
阅读更多 »1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
阅读更多 »1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基
首先siRNA由于只有二十几个碱基对,相比DNA几千上万对碱基,小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA,而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。 其次,siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于过量表达的DNA转染 …
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