英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

迄今为止，大多数基因治疗临床试验都使用了病毒载体，但仍存在多种担忧，包括致癌风险、急性免疫原性、广泛的组织亲嗜性、DNA包装能力有限，以及安全处理和大规模生产的挑战。对于将基因疗法转化为临床治疗来说，改进这些缺点的DNA传递的替代方法是至关重要的。现分享一篇体内转染（Entranster）与放射增强质粒DNA转染肿瘤研究的文献，以供参考。

动脉粥样硬化是发病率和死亡率的主要原因。动脉粥样硬化的特点是血管平滑肌细胞（SMCs）过度增殖，是多种因素联合作用的结果。流行病学调查表明，吸烟与动脉粥样硬化密切相关，在血管平滑肌细胞（SMC）的过度增殖起着关键性作用。现分享一篇ECL发光液（enlight）与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究的文献，以供参考。

下面以我们实验室所用的Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数 …

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …