首先siRNA由于只 …
阅读更多 »如何提高qPCR反应的灵敏度和特异性?
1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时,避免在引物3’端含有 …
阅读更多 »细胞培养的质量好坏是 …
阅读更多 »1. 首先确定模板RNA完整性好,无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解,在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时,避免在引物3’端含有 …
阅读更多 »RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因,就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA(Small interferin …
阅读更多 »1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »