英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar） 目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …
阅读更多 »如何利用好腺病毒感染的原理和特点？
一、原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1） 几乎可以感染所有类型的细胞 2） …
阅读更多 »慢病毒感染后，未能实现相关敲降的原因是什么？
慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释： 慢病毒包装质量问题： 病毒滴度较低，导致感染效率不高，可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体，影响敲降效果。 靶向序列设计问题： shRNA或sgRNA设计不合理，没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应，影响敲降效果。 感染条件不佳 …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述： 知道病毒的TCID50值：TCID50 是一种病毒活性的度量，表示每单位体积（通常为每毫升）病毒悬液中，能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染，为什么你的感染效率那么低？
在慢病毒感染细胞过程中，会遇到哪些问题呢？ 1.在细胞感染时， MOI是一个非常重要的指标，如何确定MOI值呢？ MOI:复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则： 1. 在细胞形 …
阅读更多 »有了它，就能不断发射争对各种病毒的疫苗
2021年2月25日，陈薇团队研发的重组新冠病毒疫苗（腺病毒载体）获批上市。她说：“这个平台好比火箭发射平台，有了它，就能不断「发射」争对各种病毒的疫苗。” 过去的几十年间，复制缺陷的人类重组腺病毒V5（HadV5）已经成为一种广泛应用在真核基因表达分析、疫苗研究等领域的模式系统。这种经修饰后的腺病毒，其E1和E3基因已被移除，依然具备细胞感染的能力，但产生 …
阅读更多 »如何选择慢病毒和腺病毒系统？
慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统（Lentivirus） 腺病毒表达系统（Adenovirus） 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞，适用于难转染的原 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
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