英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
慢病毒载体的构建： 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …
阅读更多 »病毒感染增强剂Envirus使用时出现细胞毒性怎么办？
出现细胞毒性的原因有： 1.增强剂用量过大。建议适当减少增强剂用量。 2.病毒量过大。适当减少病毒用量。 3.适当减少病毒用量。增加培养基量或更换培养基。
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »慢病毒载体构建原理
慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …
阅读更多 »使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常用什么方法？
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »慢病毒感染后，细胞不生长怎么办
慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法： 病毒滴度过高： 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染，例如在感染前 …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒（AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒，无包膜，直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒，因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒，如腺病毒共感染时，它的天然复制能力缺失，与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »慢病毒浓缩纯化的方法有哪些？
慢病毒纯化工艺，依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是由上述中的一种或几种方法组合在一起完成。 对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说，推荐使用超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞碎片会导致细胞毒性，直接影响病毒的应用。 病毒上清/粗纯病毒 科研级慢病毒 科研 …
阅读更多 »腺相关病毒和其他病毒相比有哪些优势？
腺相关病毒( adeno-associated virus，AAV) 是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）是利用AAV2 型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将目的基因的CDS 区序列或者 …
阅读更多 »腺病毒实验常见问题
1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性？ 提高 …
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