病毒感染增强

  慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后，会在1周左右开始表达，体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内，细胞的生存周期会很长，特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死，AAV基本 …

       慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …

类风湿性关节炎(RA)是一种关节炎症性疾病，其特征是慢性滑膜炎、进行性侵蚀和软骨破坏，导致关节变形和疼痛以及关节功能丧失。RA影响全世界0.5-1%的成年人，每年每100000人中诊断出有5_50人患有该病，而且在女性和老年人群中的发病率也更高。如果未经治疗，风湿性关节炎可能导致关节损伤、残疾和生活质量下降，此外还有心血管疾病和其他的并发症。该病的确切病因尚 …

1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性？ 提高 …

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …

腺相关病毒( adeno-associated virus，AAV) 是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。通常需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。重组腺相关病毒（recombinant AAV, rAAV）是利用AAV2 型基因组与不同血清型的衣壳蛋白基因组结合产生的混合体病毒载体，可将目的基因的CDS 区序列或者 …

一、原理 慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …

1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？ 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系：传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右； 针对某些原代细胞： 由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%～60%，但要确保在感染后4天时细胞 …

慢病毒载体的构建： 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …

慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释： 慢病毒包装质量问题： 病毒滴度较低，导致感染效率不高，可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体，影响敲降效果。 靶向序列设计问题： shRNA或sgRNA设计不合理，没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应，影响敲降效果。 感染条件不佳 …