英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
腺病毒属于腺病毒科，分为两个属：禽腺病毒属（鸟腺病毒）和哺乳动物腺病毒属（人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒）。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组，由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »Stem Cells International | 南京大学口腔医学院：与众不同的牙周膜细胞促生机制
研究团队通过病毒感染增强实验（EnvirusTM ，Engreen ）发现通过细胞内琥珀酸盐诱导的 HIF-1α 稳定和细胞外琥珀酸盐引起的 GPR91 激活能促进牙周膜细胞增殖、迁移和成骨分化。这项成果发表在了《Stem Cells International》期刊上（“Succinate Supplement Elicited “Pseudohy …
阅读更多 »病毒感染细胞过程中常出现的问题及解决方案
病毒感染增强剂envirus使用中常出现的问题及解决方案如下：
阅读更多 »转基因表达盒
病毒载体最常用的有遍在启动子(ubiquitous promoters) 、细胞类型特异性启动子和多聚腺苷酸化信号。 遍在启动子• 人类CMV 立即早期启动子• 小鼠干细胞病毒(MSCV) 启动子• CMV 增强子与鸡β-actin 启动子融合的CAG 杂合启动子（也称为CGA 、CBA 或CB ；在不同版本中的长度不同）• 人类EF-α• 人类磷酸甘油酸激 …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒（AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒，无包膜，直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒，因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒，如腺病毒共感染时，它的天然复制能力缺失，与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体？
AAV，即腺相关病毒载体，属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后，可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点，但AAV不会引起人类疾病。实际上，我们市面常见的AAV并不是野生型AAV，而是重组AAV（rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构（图片来源：Semantic Scholar） 目前来看，rAAV相比较其他病毒载体，未发现 …
阅读更多 »AAV载体中启动子和特殊原件的含义是什么？
hsyn：神经元特异启动子； GFAP：星形胶质细胞特异启动子； Ubiquitin：一种常用的组成型启动子。 IRES：内部核酶进入位点，起到连接两个基因，在一个启动子驱动下转录的作用。IRES连接的两个基因不会融合表达，IRES的RNA可以招募核糖体，翻译下游基因，但是IRES是一种再招募的过程，其后基因的mRNA的翻译量低于自身mRNA的数量，所以表达 …
阅读更多 »Crispr/Cas9腺病毒构建流程
Crispr/Cas9 简介 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核 …
阅读更多 »慢病毒感染，胶体金测出来很高，可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »慢病毒感染后72小时，效率低，细胞已经长满，有什么办法补救？
在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下，可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件： 细胞传代或重新播种：如果细胞已经长满（汇合度较高），可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代，重新播种在新的培养板上，使其达到较低的汇合度（例如30-50%），然后再进行感染。 优化感染时的MOI（Multiplicity of Infecti …
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