英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
用siRNA进行transient transfection不稳定，几代细胞以后，症状就会消失，所以在转染几天（1-3）后要立刻抽提蛋白，进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染，如果质粒含有抗生素位点，可以进行筛选，获得较稳定的细胞株系，但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染（infection），抗生素筛选后，可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »揭秘RNAi，缔造实验神话
RNA转染与大鼠肺辐射损伤中microRNA和mRNA表达谱整合研究
暴露与辐射中会引起细胞反应，这可能受到基因表达网络的调控。miRNA是一种小的非编码RNA，通过促进mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译来调节基因的表达。在放射性肺损伤中miRNA和mRNA的表达模式还不是很清楚，并且miRNA在这个过程中的作用还未有研究。现分享一篇RNA转染（Entranster）与大鼠肺辐射损伤中microRNA和mRNA表达谱 …
阅读更多 »RNA转染与骨形态发生蛋白-2调控PMVECs的肌源性分化研究
肝功能不全和肝硬化影响多种器官系统的脉管系统，导致器官功能受损，导致发病率和死亡率增加。肝肺综合征（HPS）是一种发生在肝硬化晚期的肺微血管疾病，加重原发性肝脏疾病，并引起多种相关并发症。由于HPS在全球范围内受到越来越多的关注，在过去几十年中，HPS的病理研究取得了进展。然而，HPS的病理生理机制尚未确定。 …
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与CHL1与胶质瘤细胞研究
与L1CAM同源（接近同源的L1）的细胞粘附分子（CHL1）是细胞粘附分子L1（L1CAM）基因家族的一个成员。虽然其表达和功能已经在一些肿瘤的报道，在小鼠胶质瘤发生发展中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染（Entranster）与CHL1与胶质瘤细胞研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与STAT3和髓源性抑制细胞研究
髓源性抑制细胞（MDSC）是一种免疫抑制性网络的主要组成部分。STAT3在调节MDSC方面有重要作用。现分享一篇用RNA转染试剂Entranster-R4000转染miRNA与STAT3和MDSC研究的文献，研究中指出，STAT3的表达可能是由miR-17-5p和miR-20a调节的，研究结果表明miR-17-5p和miR-20a可能通过阻断S …
阅读更多 »电转染实验影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究
髓系来源的抑制性细胞（MDSC）介导了广泛而深刻的免疫抑制，特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中，MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达；在人类中，MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …
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