英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
帕金森病是一种常见的神经系统疾病，是典型的纹状体功能障碍模型。它是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经退行性疾病。帕金森病的特征之一是黑质多巴胺能神经元的逐渐丧失。帕金森病患者通常有震颤、僵硬和运动迟缓的症状。遗传因素和环境因素已被纳入帕金森病的病因。对下丘脑核进行高频脑深部刺激是一种流行的外科治疗方法，但不适用于早期的PD，发展中国家的患者也无法获得。现分享一 …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究
髓系来源的抑制性细胞（MDSC）介导了广泛而深刻的免疫抑制，特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中，MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达；在人类中，MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …
阅读更多 »siRNA答疑专题总结（上）
Q1：如果慢病毒载体中没有抗性标记，只有GFP，请问还能筛选稳转的细胞传代培养吗？ A1：采用流式分选是流式细胞仪的一个功能，有流式细胞仪就可以了。一般实验室对流式都有专门的人员操作，不需要自己动手。由于没有抗性，需要注意分选过程的无菌操作。 Q2：RNA干扰如果用慢病毒做稳转的细胞株，什么样的目的RNA都可以用来干扰来做稳转的细胞株吗，目的RNA所编码蛋白 …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »shRNA转染后，什么时候做RT-PCR最好?
shRNA转染后，进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素，包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说，在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说： 24小时后：在这个时间点，可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA，这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …
阅读更多 »