RNA转染

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

原发性干燥综合征（PSS）是一种全身性自身免疫性疾病。以外分泌腺的淋巴细胞浸润为特征的，主要是唾液腺和泪腺，导致分泌功能的丧失。虽然PSS的病因仍不清楚，但许多研究已经证实树突状细胞（DCS）、NK细胞、B细胞和T细胞参与了SS的发病机制。最近的研究发现，Th1和Th17免疫应答在PSS的发展中起着关键性的作用。髓系来源的抑制性细胞（MDSC）是具有免疫抑制 …

       近年来，对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1（GLP-1）及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用，如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而，对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染试剂（Entranster）与利拉鲁肽和 …

       肝肺综合征（HPS）是肝病晚期的严重并发症，其死亡率明显增加。循环介质介导的肺血管重构（PVR）在HPS发病机制中起重要作用，但其机制尚不明确。现分享一篇RNA转染（Entranster）与内皮素-1（ET-1）与肺动脉平滑肌细胞研究的文献，以供参考。

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

       视网膜母细胞瘤（RB）是最常见的眼部肿瘤，一般在儿童时期发展，占儿童所有恶性肿瘤病例的2.5%-4%；另外，三分之二的患者在2岁之前被诊断出，95%在5岁之前被诊断出。RB具有独特的临床特点，分为单侧RB约占75%，双侧RB约占25%。RB的发病率在世界上分布不均，在印度、非洲和北美土著后裔中发病率增加。 …

人鼻病毒（HRV）是属于Picornaviridae家族肠道病毒属的单链正义RNA病毒。它在20世纪50年代首次被发现。将近60年后，已经鉴定出超过100种血清型/基因型病毒。HRVs（HV-A，-B，-C）是所有年龄组，尤其是儿童中呼吸道感染最常见的原因，但尚未开发出有效的治疗HVS的药物。现分享一篇RNA转染（Entranster）与人鼻病毒1B基因敲除 …

转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …