脓毒症是一种危及生命的临床综合征,其特征是同时存在感染和全身炎症反应。脓毒症的常见临床表现与全身炎症反应综合征和器官功能障碍有关,包括血流动力学不稳定、低氧血症和肠屏障功能障碍。此外,肠道内含有内源性和外源性微生物,据报道,这些微生物是脓毒症的潜在病原体,也可能因脓毒症而易受缺血再灌注损伤。肠屏障功能障碍可导致脓毒症继发性细菌移位和多种器官功 …
阅读更多 »体内转染与NIX/BNIP3L通路在大鼠创伤性脑损伤中潜在作用研究
NIX/BNIP3L被称为促凋亡蛋白,也与有丝分裂有关。以往的研究表明,NIX可能参与脑出血后的神经元凋亡,但在缺血性脑损伤的二尖瓣病变中也起到保护作用。NIX在治疗创伤性脑损伤中的作用尚不清楚。现分享一篇体内转染(engreen)与NIX/BNIP3L通路在大鼠创伤性脑损伤中的潜在作用研究的文献,以供参考。 文献地址:https://journ …
阅读更多 »揭秘RNAi,缔造实验神话
用siRNA进行transient transfection不稳定,几代细胞以后,症状就会消失,所以在转染几天(1-3)后要立刻抽提蛋白,进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染,如果质粒含有抗生素位点,可以进行筛选,获得较稳定的细胞株系,但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染(infection),抗生素筛选后,可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …
阅读更多 »体内转染与CREB1基因沉默和血管性痴呆小鼠认知功能障碍研究
血管性痴呆(VD)是老年痴呆的第二大病因,仅次于阿尔茨海默病(AD),在西方国家占所有痴呆病例的17.6%,研究表明在世界东部地区,包括中国和日本人口中,认知功能障碍的人数要更多。认知功能障碍广泛被认为是痴呆患者的经典特征。VD,以各种脑血管疾病为特征的损伤综合征主要与缺血性脑血管疾病相关。目前,VD的确切发病机制仍不清楚。因此,有必要更详细地阐明该病症背后 …
阅读更多 »RNA转染与桥本甲状腺炎患者T辅助细胞1型细胞研究
桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis ,HT),又称慢性淋巴细胞性甲状腺炎,是一种器官特异性自身免疫性疾病,特点是甲状腺实质淋巴细胞浸润,弥漫性甲状腺肿大和自身抗体升高的升高,主要包括抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)。HT现在被认为是最常见的自身免疫性疾病,常与其他自身免疫性疾病相关,如G …
阅读更多 »病毒感染细胞实验整体流程
目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过,可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案,有以下两种手段。 1)如果原始 …
阅读更多 »siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞(l929-a)和L929纤维肉瘤细胞(l929-n)是不同的细胞系,常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α(TNFα)的研究,TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而,当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时,l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死,在l929-a中却不是 …
阅读更多 »体内转染与miR let-7 和miR-278 调节昆虫变态和卵发生研究
昆虫的发育、变态和繁殖主要受幼激素(JH)和20-羟蜕皮酮(20E)的控制。虽然20E能引起幼虫/若虫蜕皮和变态,但JH通过抑制20E的变质作用来维持幼体的形态。JH也能刺激许多昆虫物种的雌性生殖方面,包括发育前的发育、卵黄生成和卵发生。尽管人们对20E基因中的miRNA调控机制已经有了一定的了解,但对于miRNA与JH基因中的JH信号通路的相 …
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到,怎么导入动物呢?他们想到了用英格恩动物体内转染试剂,将mimics与体内转染试剂混合后,尾静脉注射小鼠,几天后就可以观察结果,进行PCR,病理等研究,结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变,从而导致多发 …
阅读更多 »DNA转染实验中的关键点
1)优化条件:质粒不同,所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外,可选用更合适的转染试剂,如Entranster试剂。 2)抑制剂:不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素,EDTA,柠檬酸盐,磷酸盐,RPMI,硫酸软骨素,透明质酸,硫酸葡聚糖或其他硫酸 …
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