英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
缝隙连接蛋白（Cx）构成脊椎动物的缝隙连接（GJ），可调节重要的细胞过程，包括电耦合，增殖，分化和凋亡。与最初在上世纪60年代提出的“接触增长抑制”概念一致，GJ和CX被公认为肿瘤抑制；恶性肿瘤的特点是GJ的缺失。在恶性肿瘤细胞中，转染Cx以GJ依赖的方式提高放疗/化疗诱导的细胞凋亡（有毒的“旁观者效应”）。Cx在宫颈癌中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与肺癌细胞凋亡研究
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，是全世界范围内恶性肿瘤死亡原因的首位，非小细胞肺癌约占肺癌病例的80%。肺癌被认为是一种遗传疾病，内源性致病基因的异常表达导致基因组的不稳定性，从而增加癌细胞的运动性和侵袭性。尽管可以成功治疗原发性恶性肿瘤，但仍有四分之一以上的患者在术后复发和远处转移。现分享一篇运用体内转染（Entranster-in vivo）的方 …
阅读更多 »如何利用好腺病毒感染的原理和特点？
一、原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1） 几乎可以感染所有类型的细胞 2） …
阅读更多 »RNA转染与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究
柯萨奇病毒B3（CVB3）是病毒性心肌病最重要的致病因子，但目前尚无特异性抗病毒药物。小干扰RNA（siRNA）通过转录后基因沉默，已被用作抗病毒治疗策略。现分享一篇RNA转染（Entranster）与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »DNA转染（Entranster）与巨噬细胞抗炎作用研究
巨噬细胞（macrophage）活化是宿主防御病原微生物的关键过程，可引起炎症级联反应和炎症介质的释放，如TNF-α、IL-6和NO。反过来这些介质会引起炎症反应以及对邻近组织和巨噬细胞本身产生伤害。现分享一篇DNA转染（Entranster）与巨噬细胞抗炎作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿，需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量（表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞， 转染试剂和siRNA （或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »DNA转染与鞘磷脂合成酶2和H2O2诱导的内皮功能障碍研究
动脉粥样硬化（AS）是各种心脑血管疾病的主要病因，发病率和死亡率都很高。氧化应激诱导内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化的病理基础。此外，鞘磷脂和Wnt/β-连环素信号通路被认为与AS密切相关，但具体机制尚不清楚。 现分享一篇DNA转染（Entranster）与鞘磷脂合成酶2和H2O2诱导的内皮功能障碍研究的文献，以供参考。
阅读更多 »电转效率受哪些因素影响？
电穿孔效率受以下几种因素的影响： 外加电场的强度。电压过低，培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过； 电压过高，细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系， 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔， 20% ～ 50％的细胞能够存活（根据台盼蓝拒染法的检测结果） ( Patterson 1979; Baum et al. …
阅读更多 »siRNA细胞转染注意事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »腺病毒适用于哪些细胞？
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …
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