1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »RNA转染与大鼠肺辐射损伤中microRNA和mRNA表达谱整合研究
暴露与辐射中会引起细胞反应,这可能受到基因表达网络的调控。miRNA是一种小的非编码RNA,通过促进mRNA的降解或抑制蛋白质的翻译来调节基因的表达。在放射性肺损伤中miRNA和mRNA的表达模式还不是很清楚,并且miRNA在这个过程中的作用还未有研究。现分享一篇RNA转染(Entranster)与大鼠肺辐射损伤中microRNA和mRNA表达谱 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与启动子相关的小双链RNA激活研究
最近的一些报道表明,与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA;SaRNA(小激活dsRNA)]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达,这种现象被称为RNAa(RNA激活)。然而,关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子,以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entra …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与利拉鲁肽和MC3T3-E1细胞凋亡研究
近年来,对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用,如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而,对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染试剂(Entranster)与利拉鲁肽和 …
阅读更多 »RNA转染与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究
髓系来源的抑制性细胞(MDSC)介导了广泛而深刻的免疫抑制,特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中,MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达;在人类中,MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …
阅读更多 »如何做好DNA转染实验?
我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几 …
阅读更多 »体内转染与TAR DNA结合蛋白功能丧失和继发性脑损伤研究
TAR DNA结合蛋白-43(TDP-43)是一种多功能的DNA和RNA结合蛋白,参与RNA转录、选择性剪接,并可调节细胞中mRNA的稳定性。TDP-43已被证明是患有肌萎缩侧索硬化症(ALS)和额颞叶变性(FTLD)患者中神经元和胶质细胞包涵体病理学培养基的关键组分。最近的报告表明,TDP-43蛋白是一种 …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA中,怎么知道mRNA的靶区域在哪
在体外转录法制备dsRNA(双链RNA)的过程中,确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤,以帮助确定mRNA的靶区域: 1. 目标基因的选择 首先,确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息(通常从基因数据库中获得,如NCBI)。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA(siRNA)或小发夹RNA(s …
阅读更多 »细胞电转染实验效率低的原因是什么?
细胞电转染实验效率低的原因一般有以下几点: 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d …
阅读更多 »有了它,就能不断发射争对各种病毒的疫苗
2021年2月25日,陈薇团队研发的重组新冠病毒疫苗(腺病毒载体)获批上市。她说:“这个平台好比火箭发射平台,有了它,就能不断「发射」争对各种病毒的疫苗。” 过去的几十年间,复制缺陷的人类重组腺病毒V5(HadV5)已经成为一种广泛应用在真核基因表达分析、疫苗研究等领域的模式系统。这种经修饰后的腺病毒,其E1和E3基因已被移除,依然具备细胞感染的能力,但产生 …
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