前列腺癌是男性常见的癌症。其在中国的发病率在男性恶性肿瘤中占第六。目前,以多西他赛为主的化疗是激素难治性前列腺癌的首选治疗方法,可以适当提高患者的生存率。然而,化疗耐药仍是前列腺癌治疗的主要障碍。肿瘤细胞的耐药性不仅延缓了治疗周期,而且增加了毒性。化疗药物的副作用,已成为化疗失败的主要原因之一。现分享一篇RNA转染(Entranster)与前列腺癌细胞紫杉醇 …
阅读更多 »慢病毒感染细胞常见问题分析
1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少? 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量,以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系:传代周期在2-3天,感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右,则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右; 针对某些原代细胞: 由于细胞增长缓慢,可以在接种时提高汇合度到50%~60%,但要确保在感染后4天时细胞 …
阅读更多 »RNA转染与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究
柯萨奇病毒B3(CVB3)是病毒性心肌病最重要的致病因子,但目前尚无特异性抗病毒药物。小干扰RNA(siRNA)通过转录后基因沉默,已被用作抗病毒治疗策略。现分享一篇RNA转染(Entranster)与小干扰RNA在HeLa细胞中的潜在抗病毒作用研究的文献,以供参考。
阅读更多 »体内转染(Entranster)与放射增强质粒DNA转染肿瘤研究
迄今为止,大多数基因治疗临床试验都使用了病毒载体,但仍存在多种担忧,包括致癌风险、急性免疫原性、广泛的组织亲嗜性、DNA包装能力有限,以及安全处理和大规模生产的挑战。对于将基因疗法转化为临床治疗来说,改进这些缺点的DNA传递的替代方法是至关重要的。现分享一篇体内转染(Entranster)与放射增强质粒DNA转染肿瘤研究的文献,以供参考。
阅读更多 »体内转染与冠状动脉微栓塞相关的心功能不全研究
冠状动脉微栓塞(CME)是一种常见的临床事件,可自发或由程序相关的动脉粥样硬化斑块破裂急性冠状动脉综合征患者,特别是在经皮冠状动脉介入治疗(PCI)导致。大隐静脉移植物经皮介入治疗的发生率高达45%。由CME引起的短暂“无血流”或“慢血流”是急性心肌梗死患者长期预后不良的独立预测因素。此外,CME还可导致渐进性心肌功能异常,包括显性心肌梗死、收缩功能障碍、心 …
阅读更多 »慢病毒倍比稀释测定活性的实验中,DAY2天时,把稀释好的病毒和细胞孵育过夜时,用把细胞原培养基吸取出去吗,还是直接把病毒液添加进去?
好问题!在进行 慢病毒倍比稀释测定病毒滴度(titer) 的时候,DAY2 加入病毒时是否更换培养基,确实是一个关键点,对感染效率有一定影响。下面是两种常见操作方式,以及推荐做法: 推荐操作:先吸掉培养基,再加病毒(常规做法) 流程简述(以DAY2为节点): DAY1:铺板细胞(如293T、HEK293,常用于测滴度); DAY2:感染操作 吸掉旧培养基; …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下mRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么 …
阅读更多 »动物体内转染实验效果如何检测
运用Entranster-in vivo进行体内转染后,一般根据课题研究要求进行,如果单纯检测转染效率,推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究,采用组织学和生理学,以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性,通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法,由于体内取出的组织材料背景高,检测较为困难。 &nbs …
阅读更多 »提高慢病毒感染细胞效率的方法
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)lncRNA与乳腺癌治疗研究
长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们并不编码蛋白,而是以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达水平。LncRNA ASBEL已经被鉴定为编码抗增殖蛋白的BTG3(B细胞易位基因3)基因的反义转录物。 有报道称,在三阴性乳腺癌(TNBC)中BTG3显著下调。现分享 …
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