冠状动脉微栓塞(CME)是一种常见的和重要的临床现象,急性冠状综合征(ACS),和那些接受溶栓治疗、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者都会出现冠状动脉微栓塞现象。现分享一篇运用体内转染(Entranster-in vivo)方法研究细胞死亡因子4/NF-κB在猪冠状动脉微栓塞引起的心脏功能障碍中的发生机制的文献,以供参考。
阅读更多 »体内转染(Entranster)与去分化软骨瘤进展研究
去分化软骨肉瘤(DDCs)是一种特殊类型的肉瘤,约占传统软骨肉瘤(CCS)的10%~15%。DDCs是一种由两种不同成分组成的肿瘤,一种与低级别CCS相邻的恶性肿瘤,两部分之间有清晰的边界。由于早期转移而对化疗缺乏反应,DDCS预后差,5年生存率仅为10%~24%。因此,迫切需要探索CCS发展成为DDCS并找到新的治疗方法。现分享一篇体内转染(Entrans …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想怎么办?
siRNA转染效率不理想,常见的原因有: 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率 …
阅读更多 »DNA转染效率影响因素
细胞DNA转染效率的影响因素 1.细胞密度 一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键,很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此,为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性,应尽量使用适度传代的细胞系,并在不同次实验时保持细胞传代次数的 …
阅读更多 »如何选择慢病毒和腺病毒系统?
慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …
阅读更多 »ECL发光液与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究
精胺是一种天然多胺,在哺乳动物细胞中含量丰富,参与细胞生长、增殖和再生。最近,口服精胺补充剂可通过增强自噬通量对年龄相关的心脏功能障碍具有心脏保护作用。然而,精胺对心肌梗死(MI)后心肌损伤和心脏功能障碍的影响仍不清楚。现分享一篇ECL发光液(enlight)与精胺改善心肌梗死后的心脏功能障碍研究的文献,以供参考。 文献地址:https://b …
阅读更多 »电转染时,指数衰减脉冲形式的电转条件是什么?
对于engreen的Entranster-E电转染试剂,当使用0.4cm比色杯时,大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时,其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验,测试电压范围 …
阅读更多 »siRNA与DNA转染有什么不同?
首先siRNA由于只有二十几个碱基对,相比DNA几千上万对碱基,小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA,而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。其次,siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果,这对于过量表达的DNA转染来 …
阅读更多 »动物体内转染实验,局部注射,应如何取样观察结果?
运用动物体内转染试剂Entranster-in vivo进行动物体内转染实验时,由于局部注射容易造成药液分布不均,在注射的近端,药液浓度高,效果明细;远端,药液浓度低,效果低一些。所以,一方面,需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织,另一方面,后续实验取样时,在保证实验的情况下,尽量取注射区域附近的组织,不取或者少取药液覆盖差的组织,以增加实验效果。
阅读更多 »质粒DNA细胞转染注意事项
质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如 …
阅读更多 »