转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA …
阅读更多 »RNA转染与人鼻病毒1B基因敲除和干扰素应答的再激活研究
人鼻病毒(HRV)是属于Picornaviridae家族肠道病毒属的单链正义RNA病毒。它在20世纪50年代首次被发现。将近60年后,已经鉴定出超过100种血清型/基因型病毒。HRVs(HV-A,-B,-C)是所有年龄组,尤其是儿童中呼吸道感染最常见的原因,但尚未开发出有效的治疗HVS的药物。现分享一篇RN …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与LncRNA拯救肝损伤并促进肝细胞增殖研
肝损害对人类健康产生不利影响,在世界范围内发病率很高。它可由多种有毒物质引起的,例如酒精和活性氧。持续性肝损伤可导致大范围肝细胞损害,伴随严重纤维化和不可逆性肝硬化,常导致死亡。影响肝损害的很多因素现在仍不清楚,这阻碍了治疗。因此,更好地了解肝损伤的相关因素对于治疗相关的肝脏疾病至关重要。现分享一篇ECL发光液(enlight)与LncRNA拯救肝损伤并促进 …
阅读更多 »做好RNA转染的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »细胞DNA转染效率影响因素
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »慢病毒载体构建原理
慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …
阅读更多 »CCK8实验中,预培养后,更换培养基需要细胞计数吗?
一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞,用血球计数盘计数,制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话,可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到,怎么导入动物呢?他们想到了用英格恩动物体内转染试剂,将mimics与体内转染试剂混合后,尾静脉注射小鼠,几天后就可以观察结果,进行PCR,病理等研究,结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变,从而导致多发 …
阅读更多 »请问蛋白半衰期30小时,siRNA转染后大约多久收样合适呢?
既然目标蛋白的半衰期是30小时,说明它在细胞中相对稳定,也就是说,蛋白不会很快降解。 在使用siRNA干扰该蛋白的表达时,有几个关键时间点需要考虑: 一般siRNA作用流程: 转染后6–12小时:siRNA开始被细胞利用,mRNA水平开始下降。 24–48小时:mRNA水平通常显著降低(具体情况因靶基因和细胞类型而异)。 48–72小时:蛋白水平逐步下降,尤 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与玉米黄矮病毒RMV2编码的RNA沉默抑制物鉴定研究
玉米黄矮病毒RMV2(MYDV-RMV2)导致中国安徽省田间玉米植株的矮化和泛黄症状。现分享一篇ECL发光液(Enlight)与玉米黄矮病毒RMV2编码的RNA沉默抑制物鉴定研究的文献,以供参考。
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