电穿孔效率受以下几种因素的影响: 外加电场的强度。电压过低,培养细胞质膜的改变不足以允许DNA 通过; 电压过高,细胞会受到不可逆的损伤。对于大多数哺乳动物细胞系, 电压250~ 500V/cm时可达到最高瞬时表达水平。通常经过电穿孔, 20% ~ 50%的细胞能够存活(根据台盼蓝拒染法的检测结果) ( Patterson 1979; Baum et al. …
阅读更多 »Experimental Neurology | circle RNA重庆医科大学钟建军教授团队报道:调控疾病的新方向
钟建军教授团队在《Experimental Neurology》期刊上发表的“Significant changes in circular RNA in the mouse cerebral cortex around an injury site after traumatic brain injury”文章通过携带siRNA的体内转染试 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)mirRNA-423-5p与肾小管上皮细胞凋亡研究
肾小管上皮细胞(RPTECs)占到肾脏体积的90%,是构成整个肾小管间质的主要细胞类型。这些细胞对于肾功能至关重要,RPTECs的任何损伤都会使肌纤维母细胞的积累,进而导致肾小管间质纤维化。据报道,microRNAs(miRs)可以调节肾脏对于急性损伤的反应,有些mirRNA被认为在肾功能的维护和肾损伤的发展过程中起重要作用。现分享一篇体内转染( …
阅读更多 »western-blot化学发光(ECL)出现高背景的原因是什么?
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭 …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »RNA转染与MDSC细胞和原发性干燥综合征研究
原发性干燥综合征(PSS)是一种全身性自身免疫性疾病。以外分泌腺的淋巴细胞浸润为特征的,主要是唾液腺和泪腺,导致分泌功能的丧失。虽然PSS的病因仍不清楚,但许多研究已经证实树突状细胞(DCS)、NK细胞、B细胞和T细胞参与了SS的发病机制。最近的研究发现,Th1和Th17免疫应答在PSS的发展中起着关键性的作用。髓系来源的抑制性细胞(MDSC)是具有免疫抑制 …
阅读更多 »ECL发光液与PRDX3在肝癌细胞生长和发展中作用的研究
PRDX3是调节细胞氧化还原状态的线粒体过氧化物还原酶。据报道,PRDX3在肝癌中过度表达,但PRDX3在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用尚未得到很好的阐述。现分享一篇ECL发光液(enlight)与沉默PRDX3抑制肝癌细胞生长及促进细胞侵袭和细胞外基质降解研究的文献,以供参考。 文献地址:https://pubs.acs.org/doi/10 …
阅读更多 »CCK8实验,应该每次做标准曲线吗?
建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样,对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样,灵敏度可能会有轻微的差异,对于不同的批号建议分别做标准曲线。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与菱形蛋白酶RHBDD1诱导蛋白水解靶点研究
在过去的几十年中,研究发现,调节性膜内蛋白水解(RIP)在各种细胞过程中起着重要的作用,包括细胞信号转导、基因转录和凋亡。调节性膜内蛋白水解是蛋白酶在其跨膜区域内切割底物的过程。已鉴定出三种主要的膜内蛋白酶家族,包括金属蛋白酶型S2P家族、C-分泌酶和信号肽肽酶家族和菱形蛋白酶。现分享一篇DNA转染(Entranster)与菱形蛋白酶RHBDD1诱导蛋白水解 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与牛磺酸脱氧胆酸减轻早期脑损伤研究
创伤性脑损伤(TBI)是创伤性死亡和致残的主要原因之一,新的研究表明内质网应激在TBI的病理生理过程中起着重要作用。牛磺脱氧胆酸(TUDCA)是一种亲水性胆汁酸,已被报道为ER应激抑制剂和化学伴侣,并具有抑制细胞凋亡和炎症的潜力。 现分享一篇体内转染(Entranster)与牛磺酸脱氧胆酸通过Akt通路激活 …
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