细胞培养

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。 （一）组织块培养法 …

由于心血管系统发病率、病死率高，严重威胁人类生命，随着心血管疾病研究的不断深入，以体外培养的血管平滑肌细胞作为研究模型，在心血管疾病，特别是在动脉粥样硬化研究中的应用越来越广泛。 （一）材料与设备 1. 设备超净工作台、离心机、水浴锅、CO2 培养箱、－70 ℃ 冰箱，－20 °C:冰箱。2. 无菌材料培养皿、止血钳、15ml 离心管、刻度吸管、弯头吸管、T …

给养  （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶  （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存    细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …

随着细胞培养技术的不断改进，虽然正常细胞难于培养成活，科研人员还是不断研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止，几乎体内各种组织细胞均可在体外成功培养。越来越多的研究工作可应用体外培养的正常细胞作为模型开展工作。神经胶质细胞的成功培养最早由Raff 等完成。视神经胶质细胞的培养开始于1990 年，先后有多个实验室培养成功。视神经胶质细胞参与眼部多种疾病的发生、 …

聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养，使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构，然后再将球体进行静止培养，肿瘤细胞可自由从球体向周围移动，观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况，记录移出细胞数、细胞移出最远距离等，也可计算肿瘤细胞运动的速度，比较不同肿瘤细胞运动性的差别。 （一）材料与设备 50ml 锥形瓶、旋转摇动培养 …

在亲和层析纯化抗体后，通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类（如蔗糖或海藻糖）、以及醇类（如乙醇）。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性，特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议： 1. 甘油 (Glycerol) 甘油常用于抗体溶液的冷冻保存，以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为： 最终浓度：10- …

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。MTT，即四氮唑化合物，能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内，甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后，在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值，计算细胞浓度。 需注意的是，MTT只能与活 …

随着各型肝炎、肝硬化、肝癌等慢性肝病的发病率日益升高，体外培养的肝细胞也被广泛地用千肝病基础研究中。尽管细胞培养技术不断改进和成熟，国内外也先后建立了多株人肝癌细胞系，但体外分离和培养人正常肝细胞仍是非常有价值的研究材料。 （一）材料与设备 1. 设备与器材   超净工作台、离心机、CO2 培养箱、－70℃ 冰箱、－20℃冰箱。2. 无菌材料   大培养皿、 …

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法，也没有观察到病变但是实验总是不成功 …