将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料,而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上,显微镜下进行人工计数。 一、材料 血(球)计数计(改进的Neubauer 型),每次用后洗净并晾干。(也可以用其他计数器,只是格子不同。) 血(球)计数计的盖玻片(可重复使用),每次用后洗净并晾干。 含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。 计数器 悬浮好的细胞 …
阅读更多 »免疫细胞的制备方法和注意事项
随着免疫细胞生物学和分子生物学的快速发展,免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗和手术后辅助治疗的重要手段之一。 过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是近年来引起关注的免疫治疗方法。ACI 是通过将具有抗肿瘤活性,能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞注肿瘤宿主体内的一种治疗方法。ACI 应用的免疫细胞主要为 T 细胞 …
阅读更多 »体外培养细胞的一般性质(三)
体外培养细胞的能量代谢 体外培养细胞的主要能量来自葡萄糖。大多数培养液含1 g/L (5.55mmol/L)葡萄糖, 近年来含4.5g/L 葡萄糖的高糖培养液(主要是DMEM 和RPMil640 ) 使用得越来越多。这使得细胞增殖更快。葡萄糖主要被细胞用作糖酵解的碳源,以乳酸为终产物。培养细胞中三狻酸循环(也称拧檬酸循环)仍然活跃,氨基酸作为碳源,特别是谷氨 …
阅读更多 »B27添加剂(engreen)培养大鼠皮层细胞效果图
细胞污染的心得体会
细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石,许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷,被老板批评是小事,要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染,是不是细胞污染?是那种细胞污染?细胞污染后如何处理? 预防污染 细胞培养是个细致活儿,一不小心就会造成污染,最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是,进实验室之前最好洗手,很多实验者都不bother,这是国人 …
阅读更多 »细胞的支原体检测——荧光指示细胞法
常见的支原体检测方法中最简单、最经济的方法是荧光指示细胞法。该方法使用的荧光染料是烟酸己可碱,其激发波长为350nm(紫外激发),发射波长为420nm。该染料会结合到DNA 中富含A-T 的区域,由于支原体的DNA中A-T 含量占多数(55%~80%),所以可被染色而检测到。支原体污染的细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原 …
阅读更多 »如何观察细胞?
培养细胞后,要时刻观察我们的细胞,无论是用眼睛还是显微镜观察,我们要了解他们的状态,每个实验的培养条件不同,只有时刻了解他们,及时调整,才能做好后续实验。 划重点: 必须熟悉培养的细胞的正常形态,每当拿到一个新的细胞株时,要尽可能多的观察并熟悉细胞的正常生长情况。 当我们从培养箱中拿出细胞培养瓶时: 1.注意看培养基的颜色。多数培养基中都有酸碱指示剂,偏酸性 …
阅读更多 »单层细胞的培养
材料 装在冷冻培养瓶中的细胞: BS-C-1 、CV-1 、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基(表1) , 37°C PBS (可选) 胰蛋白酶/EDTA: 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …
阅读更多 »肿瘤细胞的原代培养
由于不同人种、不同民族的遗传基因不同,所以对不同疾病, 特别是对复杂疾病的易感性、对各种药物的耐受性和对各种环境因子的反应也不同,建立国人肿瘤细胞株, 可为国人疾病的诊断、防治及药物开发提供肿瘤模型。 (一)材料与设备 1. 无菌材料眼科剪,眼科镂, 一次性培养皿,细胞培养瓶T25 、T75 , 冻存管,一次性小滤器, 一次性离心15~50ml, 高糖DME …
阅读更多 »实验中最常见的英文缩写词汇释义
alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal β-半乳糖苷酶 Bis N, N’-亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …
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