细胞培养

基质凝胶培养是研究细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的重要方法，如细胞运动性、肿瘤细胞的侵袭转移能力的研究。现在应用最广泛的凝胶为I 型鼠尾胶原，其他还有纤维蛋白胶原、血浆胶原等。 （一）材料与设备 胶原凝胶I (collagen I) 、完全培养液、培养皿（直径35mm)、吸管、移液枪、CO2 培养箱。 （二）操作步骤 1．用完全培养液调节胶原凝胶的浓度为 …

持续传代的细胞株有更高的生长速率、克隆效率、成瘤率和更多的染色体组型。 持续传代细胞株经常被改造成所需的独特表型。 细胞株分化度越高，它的生长也就越慢。 常用的细胞株 细胞株 细胞类型和来源 贴壁或悬浮培养 3T3 成纤维细胞（鼠，胚胎） 贴壁培养 BHK21 成纤维细胞（叙利亚仓鼠，肾脏） 悬浮培养 MDCK 上皮细胞（狗，肾脏） 贴壁培养 ES 胚胎干细 …

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液） 1X10-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水配制( …

在筛选 shRNA 细胞系后，如果你发现 RNA没有变化，但 蛋白水平减少，可能有多种原因。这里有一些可能的解释： 1. 转录后调控（Post-transcriptional regulation） miRNA或其他RNA调控：尽管shRNA能够靶向mRNA并降解其转录产物，细胞内可能存在 miRNA 或其他转录后调控机制（如RNA结合蛋白）影响 mRNA …

是的，如果哺乳动物细胞同时表达两个质粒，且这两个质粒使用相同的启动子，它们可能会发生表达竞争（expression competition）。这种情况通常会影响两个质粒上基因的表达水平，具体影响程度取决于多个因素。 原因 转录因子的竞争： 启动子区域的转录因子结合位点是有限的。如果两个质粒使用相同的启动子，它们可能会争夺同一批转录因子。这种竞争会导致转录因子 …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基， 37’C 预热 培养瓶 装有70 ％乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1.    G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞，主要不同在于它们失去了接触抑制生长，获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。 材料 2% (w/ v) 琼脂 基础营养培养基，如DMEM ，含24. 6 ％和20% (v/ v) 胎牛血清 单细胞悬液 12 孔培养板 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ，灭菌 对 …

1. 使用不同的启动子：为两个质粒选择不同类型的启动子，避免它们之间的竞争 这个建议是针对以下情况的： 启动子竞争效应：如果两个质粒使用相同或类似的启动子，尤其是强启动子（例如，CMV启动子），它们可能会争夺有限的转录因子和转录机制资源（如RNA聚合酶）。这种情况下，启动子竞争可能导致一个质粒的表达被抑制，从而影响另一个质粒的表达。 例如，如果两个质粒都使用 …