英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
给养 （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶 （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存 细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …
阅读更多 »RNA转染影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA和 …
阅读更多 »使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常用什么方法？
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »细胞生长速度非常快，现在在密度20-30%时就开始转染，但是到了60小时后细胞密度已经非常高，几乎没有空隙。如果继续等待，是否会导致细胞状态不佳，从而影响到实验中蛋白的表达效果。
细胞密度确实会影响转染效率和蛋白表达。如果细胞密度过高，可能会导致以下问题： 营养和废物积累：高密度会导致培养基中的营养迅速消耗，废物积累增加，这会影响细胞的健康状态，进而影响蛋白表达。 转染效率降低：高密度时，转染试剂和DNA更难均匀分布，影响转染效率。 蛋白表达影响：过度拥挤的细胞状态可能导致蛋白表达效率下降，甚至可能出现表达异常。 建议： 调整转染密度 …
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »脂质体细胞转染试剂的缺点
已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Bio …
阅读更多 »TUNEL分析
TUNEL方法（末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-地高辛配基切口标记）源自完整固定的细胞核DNA 裂解部位标记（如Gavrieli et al. 1992)。 该法可用于组织切片、玻片上细胞生长、流式细胞计量术分析，用于组织切片的改进程序由Naik 及其合作者提出(Naik et al. 1996) ，叙述如下 1、组织切片的TUNEL 染色1）取下组织， …
阅读更多 »活细胞的显微计数方法及步骤
将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料，而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上，显微镜下进行人工计数。 一、材料 血（球）计数计（改进的Neubauer 型），每次用后洗净并晾干。（也可以用其他计数器，只是格子不同。） 血（球）计数计的盖玻片（可重复使用），每次用后洗净并晾干。 含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。 计数器 悬浮好的细胞 …
阅读更多 »电转染实验时，siRNA有什么要求？
使用高纯度、无菌的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。建议在250-750nM最终浓度范围内的进行siRNA不同浓度的梯度实验。建议设置一个非靶向或无意义的siRNA对照序列，以验证实验siRNA的特异性。同时也验证，针对单个基因用多个siRNA序列实验产生的表型是否是由于脱靶 …
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