英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
PCR 法是20 世纪80 年代中期建立起来的一种体外DNA 扩增实验，其基本原理是酶促DNA 合成反应，即在DNA 模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA 聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该实验具有灵敏度高、特异性强、检测快速的特点，但其对实验环境要求严格， 实验成本较高， 有时还会出现假阳性的现象。 （一）材料与设备 支原体PCR 检测试剂盒、dN …
阅读更多 »电转染时，指数衰减脉冲形式的电转条件是什么？
对于engreen的Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm比色杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验，测试电压范围 …
阅读更多 »RNA细胞转染实验影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RNA …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »转染用的质粒，你提对了吗？
老板天天催着要实验进展，是不是很郁闷？可是细胞不给力，是不是很忧郁？刚刚复苏的细胞长的挺好的，可是转染后，细胞状态莫名其妙就变差了，是不是很伤心？转染试剂毒性大，换转染试剂？结果还是一样，是不是很无奈？勉强收了一点点细胞，可是还不够做个western blot的，是不是很抓狂？实验总是不能顺利进行，找不到原因，是不是都要吐血了？没人给指点迷津，是不是心都要碎 …
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内 …
阅读更多 »siRNA转染效率低的原因有哪些？
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »藻类细胞电转效率特别低有什么解决方案
对于藻类细胞电转效率特别低的问题，主要考虑以下。 质粒纯度和浓度： 如果质粒 DNA 的纯度不够，或者有蛋白质、RNA、内毒素等污染，可能会影响电转效率。建议确保质粒通过高质量的提取试剂盒提取，且 OD260/OD280 比率应在 1.8-2.0 之间。 质粒浓度过高或过低都可能影响转化率，建议对质粒浓度进行优化，一般而言，20-50 ng/μL 的浓度是比 …
阅读更多 »细胞RNA转染的建议
为了做好RNA转染实验，提出几点关于细胞RNA转染实验的建议，供大家参考： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »慢病毒感染后，细胞不生长怎么办
慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法： 病毒滴度过高： 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染，例如在感染前 …
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