2025年 3 月 15日, 星期六
新闻

核酸基因

转子的类型及用途

转子主要有4 种类型:角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器,另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途:样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明:样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点:离心见效最快。物质具有更高的相对离心力,比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少,损坏机会小。 缺点:物质被驱向离心管的管壁方向,然后 …

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如何将胶内物质转移到膜上?

凝胶是厚而易碎的基质,这使得操作与温浴都很困难。如果要对胶内的内容物进行杂交,必须将内容物从凝胶引导到硝酸纤维素膜或者尼龙膜上。这一过程称为转移。 转移之后,滤膜与一个探针温浴,观察探针是否能与滤膜上的分子杂交。探针由放射性元素或者其他指示剂标记,所以可以被检测。滤膜与探针的杂交称为印迹。 第一次使用印迹技术是由Southern 描述的, 因此, 这种印迹被 …

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什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一 …

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降落PCR实验原理及步骤

降落PCR(touchdown PCR),一种PCR技术,主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行,例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低,但退火温度过低则会使非特异扩增过多。 实验材料: 基因样品 仪器、耗材: PCR仪 实验步骤: 1、反应体积为50 μl。 2、人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系:CD1 …

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RNA的种类

dsRNAdsRNA 即双链RNA , 是由两条互补链复性形成的RNA 分子,可以被Dicer 酶切割形成siRNA 。 Endo-siRNAEndo-siRNA 即内源性小干扰RNA (siRNA) ,是一类存在于几乎所有真核生物中的小干扰RNA 分子。 exo-siRNAexo-siRNA 即外源性小干扰RNA (siRNA) ,是指通过体内或者体外技术 …

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构建小RNA 高通量测序文库

小RNA 克隆和高通量测序的结合是纯化和鉴别细胞或组织中小RNA 的有效先进技术。本方案描述了用于Illumina Genome Analyzer 高通量分析的19 ~ 29 个核苷酸小RNA 的克隆方法,通过聚丙烯酰胺凝胶从总RNA 样品中分离纯化小RNA, 并进行两步连接反应:小RNA3′ 端与5′ 腺苷酸DNA 连接物的连接;以 …

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小RNA 的Northern 杂交分析

该方案描述如何运用Northern 杂交检测15~150 个核昔酸的小RNA (图1) 。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离总RNA, 再采用半干法进行转膜。RNA 通过紫外线照射交联至尼龙膜上,在Church 缓冲液中对RNA 和α-32p标记的寡核昔酸探针进行杂交,并用磷酸成像分析技术(phosphorimager analysis) 进行检测分析。使用包含两个 …

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PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

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离心机的种类

有很多关于离心机类型的描述性术语,但那些不是严格的定义。在实验室中,离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置,之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机, 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上,反而经常放在桌子底下。 用途:沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数: 角式17000 …

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