2025年 3 月 15日, 星期六
新闻

核酸基因

RNAi、miRNA及siRNA的区别和联系

RNA干扰 (RNAi):近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。 MicroRNA(miRNA,微RNA): …

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PCR-SSCP实验步骤

一.样品制备 1.PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测,上样量3-5ul。PCR产物为10ng/nl左右为最佳。 2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ul  SSCP上样缓冲液(变性缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶 …

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普通PCR的基本原理和注意事项

1、概述 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。DNA聚合酶(DNA polymerase I)最早于1955年发现,而较具有实验价值及实用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于70年代的初期由Dr. H. K …

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反转录定量PCR 分析小RNA

Northern 杂交可以揭示小RNA 的表达水平,同时也可揭示小RNA 的长度,并且是小RNA 验证和定量的标准。然而, Northern 杂交不能用来检测低丰度小RNA, 也不能检测大量的小RNA 种类。相比之下,定量RT-PCR 更加敏感并且可以适用于高通量处理(图1) 。 图1 小RNA 定量RT-PCR 分析流程图。 试剂 mirVana miRN …

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RNA的种类

dsRNAdsRNA 即双链RNA , 是由两条互补链复性形成的RNA 分子,可以被Dicer 酶切割形成siRNA 。 Endo-siRNAEndo-siRNA 即内源性小干扰RNA (siRNA) ,是一类存在于几乎所有真核生物中的小干扰RNA 分子。 exo-siRNAexo-siRNA 即外源性小干扰RNA (siRNA) ,是指通过体内或者体外技术 …

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DNA 的 PCR 扩增

一、 PCR反应体系的组成 1.PCR扩增缓冲液: 50mM     KCl10mM    Tris HCl( pH8.0)1.5mM   MgCl2 2.寡核苷酸引物:是按已知待扩增的DNA 片段序列进行设计,用 DNA合成仪合成。引物序列应位于DNA片段的保守区,两条引物间应注意不要有 …

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siRNA是从牵牛花过表达发现的吗

siRNA(small interfering RNA, 小干扰RNA)并不是从牵牛花的过表达现象中发现的,而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来的。siRNA的发现归功于对基因沉默和RNA干扰机制的研究,尤其是科学家在植物、真菌和线虫等生物中对这些现象的观察和研究。 siRNA发现的关键研究 植物基因沉默:在植物中,科学家观察到特定基因可以在 …

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测序胶的灌制、电泳及处理

推荐用6 %丙烯酰胺、非梯度胶为起点。可使用两种胶:一种在相对短的时间获得较短的寡核苷酸信息;另一种是用较长时间以使较长的寡核苷酸得到最大限度的分离。这两种凝胶分离过程,采用6 %丙烯酰胺,可以从一套测序反应中获得300~350 个碱基的序列信息。另一种可选的方案是使用两种不同浓度的胶,使较短片段和较长片段的寡核苷酸得到最大限度的分离。 材料 盛于喷射洗瓶的 …

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慢病毒感染细胞后,细胞长满48小时是否可以先传代,再等到72小时再喷霉素筛选吗

通常在进行慢病毒感染后,建议遵循以下操作步骤: 感染后观察细胞状态:感染后一般在48-72小时内可以看到较为明显的表达,但是否开始筛选需要看细胞的状态和感染效率。如果细胞长满了,可以考虑先进行传代,以避免细胞过度拥挤影响生长和感染效果。 喷霉素筛选的时机:喷霉素通常在感染后48-72小时开始筛选,但实际开始筛选的时间取决于感染效率和细胞状态。如果细胞感染后状 …

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shRNA转染后,什么时候做RT-PCR最好?

shRNA转染后,进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素,包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说,在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说: 24小时后:在这个时间点,可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA,这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …

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