2025年 3 月 18日, 星期二
新闻

核酸基因

DNA的乙醇沉淀

沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的,而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。 一、步骤 于最多体积450 μl 的DNA 样品中,加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。 加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇,充分混匀。 样品踩于冷环境中沉淀:-20℃ 过夜,或-70℃30 min, 或干冰中5 min 。 使用干冰进行乙醇沉淀 …

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shRNA转染后,什么时候做RT-PCR最好?

shRNA转染后,进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素,包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说,在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说: 24小时后:在这个时间点,可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA,这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …

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转子的类型及用途

转子主要有4 种类型:角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器,另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途:样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明:样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点:离心见效最快。物质具有更高的相对离心力,比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少,损坏机会小。 缺点:物质被驱向离心管的管壁方向,然后 …

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体外转录法制备dsRNA

该方案是简单而且得到广泛应用的、利用PCR 模板制备双链RNA 的体外转录反应。该方法制备的dsRNA 可以用于在某些细胞或者组织中诱发RNA 干扰。 试剂 琼脂糖凝胶( 1 %)复性缓冲液( 10 X)ATP 、CTP 、GTP 、UTP ( 每种100mmol/L )二硫苏糖醇( DTT ) ( 1mol/L)DNA 分子质量标准dNTP 混合液,每种1 …

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真空浓缩仪的使用方法

  如果在乙醇沉淀后,核酸中还残留乙醇,就很难用水或缓冲液溶解沉淀。如果你急用或者需要去除大体积的挥发性液体,可以使用真空浓缩设备。真空浓缩设备由离心机、真空泵、加热器和冷凝装置组成,其组合模式多种多样,相关的实验室使用规则变化更多。 一、步骤 使用真空浓缩设备前至少30min 打开冷凝装置。在有些装置中,可能需要加入干冰。 打开真空泵。 开通风管以释放离心 …

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细胞转染siRNA后,目标基因的表达反而升高的原因是什么?

siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起,常见的因素包括: siRNA设计不合理: siRNA的靶点选择不佳,未能有效靶向目标基因的mRNA,导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题: 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞,从而未能有效抑制目标基因。 …

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南京中医药大学:忍冬苷靶向EZH2减轻溃疡性结肠炎通过自噬介导NLRP3炎性体失活

结肠巨噬细胞内NLRP3炎症小体的异常激活与溃疡性结肠炎的发生发展密切相关。虽然靶向NLRP3炎症小体被认为是一种潜在的治疗方法,但其调节肠道炎症的潜在机制仍存在争议。 2021年3月9日,发表于Acta Pharmaceutica Sinica B(影响因子11.413)的一篇题为Lonicerin targets EZH2 toalleviate ulc …

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RNA的种类

dsRNAdsRNA 即双链RNA , 是由两条互补链复性形成的RNA 分子,可以被Dicer 酶切割形成siRNA 。 Endo-siRNAEndo-siRNA 即内源性小干扰RNA (siRNA) ,是一类存在于几乎所有真核生物中的小干扰RNA 分子。 exo-siRNAexo-siRNA 即外源性小干扰RNA (siRNA) ,是指通过体内或者体外技术 …

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如何做好Northern Blot实验?

准备阶段:1.180度烤器皿:三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。电泳槽:清洗梳子和电泳槽,并用双氧水浸泡过夜,用DEPC水冲洗,干燥备用。处理DEPC水(2 L)备用。2.用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子,电泳槽,刀片等,然后用DEPC水冲洗二次,去除RNAZap。 制胶: 1. 称取0.36mg琼脂糖加入三角锥瓶中,加入 …

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慢病毒感染后,未能实现相关敲降的原因是什么?

慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释: 慢病毒包装质量问题: 病毒滴度较低,导致感染效率不高,可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体,影响敲降效果。 靶向序列设计问题: shRNA或sgRNA设计不合理,没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应,影响敲降效果。 感染条件不佳 …

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