核酸基因

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 二、 目前，荧光定量PCR所使 …

RNA 降解是非常严重的问题，在RNA提取过程中，为防止降解我们需要遵守以下4点基本规则：基本规则1. 把所有接触RNA 的塑料制品以及玻璃制品都高压灭菌。 2. 用于RNA 缓冲液的所有水都要经DEPC 处理。加DEPC 到终浓度0.1% ，再室温放放置过夜，或者灭菌15 min 。DEPC 不能用于Tris 缓冲液，因为DEPC 将会降解成乙醇和二氧化碳 …

小量制备可以从细菌培养物中抽提和分析，离心机12 或16 管足够一次制备。 一、材料 5 ml 过夜培养细菌培养物。使用LB培养基加入合适的抗生素培养单克隆菌体，37’C 振荡培养 灭菌的微桩离心管 冰 溶液I （裂解缓冲液， 25 mmol/L Tr的HCI pH8.0, 50 mmol/L葡萄糖， 10 mmol/LEDTA) ，冰上预冷 溶 …

cDNA文库的构建分为六个阶段： 阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链 1．在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成： poly(A)+RNA (1μg/μl)    10μl 寡核苷酸引物(1μg/μl)     1μl 1mol/L Tris-HCl (pH8.0, 37℃)     2.5μl 1mol/L KCl 3.5μl …

降落PCR（touchdown PCR），一种PCR技术，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。 实验材料: 基因样品 仪器、耗材: PCR仪 实验步骤： 1、反应体积为50 μl。 2、人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD1 …

该方案描述如何运用Northern 杂交检测15~150 个核昔酸的小RNA （图1) 。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离总RNA, 再采用半干法进行转膜。RNA 通过紫外线照射交联至尼龙膜上，在Church 缓冲液中对RNA 和α-32p标记的寡核昔酸探针进行杂交，并用磷酸成像分析技术(phosphorimager analysis) 进行检测分析。使用包含两个 …

缓冲液 使用液 浓贮存液（每升） Tris-乙酸（TAE） 1×：0.04mol/L Tris-乙酸 50×：242g Tris 碱 　 0.001mol/L EDTA 57.1ml 冰乙酸 　 　 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE） 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 10×:10g Tris 碱 　 0. …

一、Real-time qPCR定量方法 可以分为绝对定量和相对定量。 绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA，体外转录的RNA，或者是体外合成的ssDNA。 相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值 …

CRISPR的热度在分子生物界持续了数年，而2020年的诺贝尔化学奖授予给了两位CRISPR的奠基者，更是将CRISPR的研究热潮推上了顶峰。 CRISPR实际是（clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats，成簇的有规律的间隔短回文片段）的简称。 1987年，科学家在大肠杆菌中发现了一段“ …

一、实验材料、试剂、仪器耗材： 人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等 二、相关溶液的配制 （1）20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g柠檬酸钠，加水至1 00 …