分子生物学

转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后 …

mRNA 在细胞总RNA 中占较小的比例，大量的是核糖体RNA。真核生物的mRNA分离方法利用了大多数mRNA 存在多聚腺苷酸尾巴（有一些mRNA 没有多聚腺苷酸的尾巴）。Poly(A) RNA 可以结合在有多聚寡核苷酸(dT) 的树脂上，在高盐的条件下寡聚胸苷酸－纤维素可以结合PolgA-mRNA, 在低盐的情况下洗脱。这种方法可以批量或者在一个小柱子上操 …

原位PCR 在科学研究中，每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世，从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域，50年代电子显微镜引入形态学观察领域，带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究；60-70年代，免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用，又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子水平，使细胞内众多的活性物质得以进行细胞或亚细胞水平的定位，对医 …

随着亲和层析技术的发展，蛋白纯化技术相对简单，蛋白纯化技术的应用也越来越普遍，一步亲和层析即可达到90%以上的纯度。然而，蛋白纯化的过程中各个环节不容忽视。样品处理，纯化介质的选择，纯化方法的考虑，等等，虽然纯化方法简单，但是蛋白不同，采用的纯化体系也不尽相同。只要达到最终的纯化目的就是最好的纯化方法。 对于亲和层析纯化抗体，不论是蛋白A/G还是特异性抗原亲 …

离心方法主要有两种：制备型（用来分离某些颗粒）和分析型（用来了解分离颗粒的物理性质）。 分子或细胞生物学实验室中所作的决大多数离心机属于制备型离心机，而多数常规制备型离心是差速离心。 g 力和每分钟旋转次数(rpm) 是大略的值：取决于所用的离心机型号和转子。 差速离心（沉淀） 原理：样品在一定速度下离心，分成上清部分与沉淀部分。样品根据沉降速度不同得到分离 …

siRNA转染后目标基因不降反升的现象可能由多种原因引起，常见的因素包括： siRNA设计不合理： siRNA的靶点选择不佳，未能有效靶向目标基因的mRNA，导致抑制效果差或反而激活了基因表达。可以尝试设计不同的siRNA靶点或使用更为优化的siRNA工具进行设计。 转染效率问题： 低转染效率可能导致siRNA无法进入足够多的细胞，从而未能有效抑制目标基因。 …

材料靶抗原： 表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)实验动物： 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)1~2ml玻璃注射器（有Luer-Lok 接头，已消毒）三通管100ml 烧杯20G …

出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面： 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体，或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体，或降低抗体浓度，缩短抗体孵育时间，优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量，延长洗膜时间，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。 4. …

ECL Western特异发光检测试剂盒用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。下面以engreen的超敏型ECL发光液Enlight-Plus为例，说一下检测实验步骤。 1. 常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。 注意：Enlight-Plus 推荐的抗体稀释度为: 储存液浓度为1mg/ml 的一抗推荐稀释度 …

【实 验 原 理】 磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法。磷酸钙有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞，被转染的DNA可以在细胞内进行瞬时表达，也可整合到靶细胞的染色体上从而产生不同基因型和表型的稳定克隆。该方法可广泛用于转染许多不同类型的细胞。 【仪器、材料和试 …