siRNA(small interfering RNA, 小干扰RNA)并不是从牵牛花的过表达现象中发现的,而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来的。siRNA的发现归功于对基因沉默和RNA干扰机制的研究,尤其是科学家在植物、真菌和线虫等生物中对这些现象的观察和研究。 siRNA发现的关键研究 植物基因沉默:在植物中,科学家观察到特定基因可以在 …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因?
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭不 …
阅读更多 »双脱氧法DNA 测序常见问题
问题 可能原因 解决方法 放射自显影片空白 DNA 聚合酶失活 标记物太旧 用对照引物、模板及试剂进行试验 试剂太旧 替换缺陷试剂 不正确或有缺陷的引物 不正确或有缺陷的模板, 曝光失误(如保留了保鲜膜,凝胶对着胶片的背面等 改正错误 整张放射自显影片太亮/标记物掺入不足 标记物太旧 采用新标记物 酶活性太低 采用 …
阅读更多 »cDNA文库构建分为哪些阶段?
cDNA文库不同于基因组文库,被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。cDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始,在此基础上,通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链,然后除掉mRNA,以第一条DNA链为模板复制出第二条DNA链(双链);再进一步把此双链插入原核或真核载体。 cDNA文库的构建 …
阅读更多 »2024诺贝尔化学奖之蛋白质结构预测
蛋白质结构预测(Protein Structure Prediction)是一项利用计算方法预测蛋白质分子的三维结构的技术。由于蛋白质的功能很大程度上依赖于其三维结构,预测其结构对理解生物过程、药物设计等领域具有重要意义。然而,实验确定蛋白质结构(如X射线晶体学、核磁共振等方法)耗时费力,因此计算预测成为重要替代方法。 蛋白质结构预测的主要方法 同源建模(H …
阅读更多 »基因克隆连接到T载体是不是多此一举?
T载体是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。我们都知道,做基因克隆目的基因连接到载体,使目的基因能够在受体细胞进行稳定遗传。部分朋友是把目的片段先克隆到T载体后再酶切连接目的载体的,有部分朋友就直接将PCR产物酶切连接到能够将目的基因带入受体细胞进行稳定遗传的载体中。那么进行TA克隆到底是不是多此一 …
阅读更多 »离心机的种类
有很多关于离心机类型的描述性术语,但那些不是严格的定义。在实验室中,离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置,之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机, 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上,反而经常放在桌子底下。 用途:沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数: 角式17000 …
阅读更多 »应用长链dsRNA 抑制基因表达
在植物以及大多数真菌、非哺乳动物及其细胞系中,应用外源性长链dsRNA或者表达长反向重复RNA 转录物能够诱发细胞内相应mRNA 的降解(Fire et al 1998; Kennerdell and Carthew 1998; Misquitta and Paterson 1999) 。哺乳动物卵母细胞和dsRNA 诱导干扰素反应缺失的哺乳动物细胞系中,长 …
阅读更多 »色谱法分离蛋白质
色谱 与DNA 和RNA 一样,蛋白质可以进行常规的分离,或者用色谱法来分离。主要用的色谱法是凝胶过滤、 离子交换层析和亲和层析。 1. 凝胶过滤,基于分子的大小对物质进行分离。 工作原理:固定相中包含有很多的孔,只有较小的分子才可以进入。 填料:葡聚糖(交联右旋糖苷)、Sephacryl (烯丙基葡聚糖和N, N-亚甲双丙烯酰胺 …
阅读更多 »分子克隆中常用的其他酶
一、DNA 聚合酶 分子克隆中的许多步骤都涉及在DNA 聚合酶催化下的DNA 体外合成反应。这些酶作用时大多需要模板,合成产物的序列则与模板互补。大多数聚合酶优先作用于DNA 模板,但也可拷贝RNA ,尽管这时效率较低。最常用的依赖于DNA 的DNA 聚合酶是大肠杆菌DNA 聚合酶 I (全酶)、大肠杆菌DNA 聚合酶I 大片段(Klenow 片段)、T4 …
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