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western-blot实验成功的条件 1.        样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.        …

1，        质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2，        质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的 …

为了做好RNA转染实验，提出几点关于细胞RNA转染实验的建议，供大家参考： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

1、细胞太少或细胞密度太大 细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等。 阳离子脂质体 …

细胞培养技术是细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究的基础实验技术之一。通过细胞培养可以直接观察活细胞的形态结构和生命活动，联合各种技术进行各种物理、化学生物的研究。 一、准备工作 细胞培养的准备工作是很重要，也很复杂的一项工作，应予以重视。 1.无菌室及无菌操作台 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等 …

上图为engreen的qPCR试剂，通过对比，可以发现engreen的qPCR试剂不会出现NTC扩增产物，特异性更高。

荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …

       确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×10^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×10^6细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×10^6细胞/ml。 如需了解更多关于电转染试剂的信息，请点击https://www.engreen.com …

2015年6月份，苏州大学附属第一人民医院神经科学及脑神经研究所在《Critical Care Medicine》杂志发表了一篇影响因子为6.312的SCI文章《Cyclophilin A/Cluster of Differentiation 147 Interactions Participate in Early Brain Injury After S …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …