为了做好RNA转染实验,提出几点关于细胞RNA转染实验的建议,供大家参考: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »细胞培养之新手必看
细胞培养技术是细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究的基础实验技术之一。通过细胞培养可以直接观察活细胞的形态结构和生命活动,联合各种技术进行各种物理、化学生物的研究。 一、准备工作 细胞培养的准备工作是很重要,也很复杂的一项工作,应予以重视。 1.无菌室及无菌操作台 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等 …
阅读更多 »Hela细胞转染后死亡是什么原因?
可能有多种原因: 目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡; 转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害; 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试Entranster转染试剂。 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考 …
阅读更多 »qPCR试剂对比2
上图为engreen的qPCR试剂,通过对比,可以发现engreen的qPCR试剂不会出现NTC扩增产物,特异性更高。
阅读更多 »细胞转染实验方法有哪些?
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年,此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »支原体污染的7大问题
之前本站发表过一篇关于细胞污染的预防及拯救的文章,部分朋友对于支原体污染有一定的困扰,现就支原体污染常见问题进行解答。 Q1: 支原体污染对细胞有什么危害? A: 支原体污染后,不会使细胞死亡可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞收到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等,以致影响实验 …
阅读更多 »如何做好siRNA转染实验?
为了做好siRNA转染实验,在转染过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导 …
阅读更多 »如何应对悬浮细胞转染的难题?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞 …
阅读更多 »PCR实验扩增产物出现杂带的原因
可能的原因和对应的解决方案如下: 1.引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 度为梯度设计梯度 PCR …
阅读更多 »HepG2细胞的电转染条件是什么?
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时HepG2细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为170V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,细胞密度为5×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250 …
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