1.调整硫酸铵溶液饱和度计算表(25℃) 2.调整硫酸铵溶液饱和度计算表(0℃) 3.硫酸铵饱和溶液
阅读更多 »细胞转染效率低下的几个陷阱
细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …
阅读更多 »细胞转染效率影响因素有哪些?
细胞转染效率受多种因素影响,主要因素有下面几个: 1.转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒的转染试剂,如Entranster …
阅读更多 »如何提高细胞转染效率?
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »ECL发光液使用过程中注意事项
1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久,请避光保存,在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果,优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 对于Enlight发光液,应避免使用NaN3 回收HRP 偶联的抗体,因为NaN3 能抑制HRP 的活性。
阅读更多 »细胞转染效率低的原因是什么?
转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …
阅读更多 »电转染实验效率影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素,细胞在电场的作用下,膜通透性增加或是形成小孔,以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此,一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值,其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外,还可以 …
阅读更多 »miRNA转染(Entranster)与白细胞介素IL-23受体和甲状腺炎研究
Hashimoto甲状腺炎(HT)是一种典型的器官特异性自身免疫性疾病,其特征是自身对甲状腺抗原的耐受性降低。白细胞介素IL-23受体(IL-23R)越来越被认为是自身免疫性疾病的一个关键点,包括Hashimoto甲状腺炎(HT)。然而,调节IL-23R表达的分子机制尚不清楚。现分享一篇miRNA转染(Entranster-R4000)与白细 …
阅读更多 »悬浮细胞不易转染怎么办?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂, …
阅读更多 »western-blot实验结果影响因素
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
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