1, 质粒的构建:启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。 2, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转 …
阅读更多 »细胞DNA转染效率影响因素
1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …
阅读更多 »世界上最遥远的距离之荧光定量PCR
世界上最遥远的距离不是天涯海角,而是我天天和你在一起,你却不了解我。 荧光定量PCR常做,相关概念常说,可它们到底啥意思? 荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念 基线(Baseline):是指在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大。接近一条直线,这样的直线即是基线。 荧光域值(threshold)的设定:一般将 PCR …
阅读更多 »细胞转染是否可以加血清?
传统的转染试剂有一定的细胞毒性,在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如,阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质,在转染过程中,带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附,影响转染效率。另外,使用脂质体等转染试剂时,由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞,引发细胞毒性 …
阅读更多 »提高细胞转染效率的方法
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如Entr …
阅读更多 »肿瘤坏死因子受体‑相关因子6(TRAF6)是一种重要的E3泛素连接酶 ,在先天免疫和适应性免疫中有着重要的作用 。TRAF6被报道可参与鳞状细胞癌和胃癌的侵袭性生长和转移,以及骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病 。由于TRAF6在众多的信号转导通路具有很重要的地位,使得它成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。现分享一篇RNA转染(Entranster)与骨髓瘤细胞中R …
阅读更多 »PCR试剂效果图
如图所示,engreen的PCR试剂跑出来的条带清晰,准确,无非特异性扩增条带,是理想的PCR试剂。
阅读更多 »细胞转染实验的建议
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »细胞转染效率重复性差的原因
转染效率重复性差原因: 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂,培养基可加抗生素,避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
阅读更多 »高效低毒的RNA转染试剂,收藏~
EntransterTM-R4000是英格恩生物(Engreen Biosystem)最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA,而且针对mRNA等长链RNA优化。 EntransterTM系列转染试剂的成分和原理 Entr …
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