英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »western-blot实验注意事项
·滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 ·滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 ·因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 ·滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的 …
阅读更多 »免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解（二）
基本方案2 木瓜蛋白酶水解IgG 获取Fab 片段的大量制备 材料 木瓜蛋白酶 ( 2 X 重结晶悬液 ) 水解缓冲液：0.02mol/L EDTA （ 二钠盐） / 0.02mol/L 半胱氨酸／PBS （新鲜配制，冰上保存<10h) 溶于PBS 中浓度≥1mg/ml 的IgG （ 总量≥5mg ) 碘乙酰胺结晶 PBS, pH8. 0 蛋白A …
阅读更多 »如何提高细胞转染效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »细胞转染实验注意事项
1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …
阅读更多 »如何提高悬浮细胞的转染效率？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周 …
阅读更多 »为什么western-blot化学发光（ECL）会出现高背景？
Western Blot发光经常有“背景太高”问题，导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面： 1. 抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过降低抗体稀释度，增加洗膜次数和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。 2. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导 …
阅读更多 »细胞转染效率影响因素
转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 1．转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低 …
阅读更多 »动物体内转染实验的效果如何检测
运用Entranster-in vivo进行体内转染后，一般根据课题研究要求进行，如果单纯检测转染效率，推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究，采用组织学和生理学，以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性，通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法，由于体内取出的组织材料背景高，检测较为困难。
阅读更多 »如何做好细胞电转染实验？
要想做好细胞的电转染实验，应注意以下几点： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择 …
阅读更多 »