悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞 …
阅读更多 »RNA转染影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA和 …
阅读更多 »脂质体细胞转染试剂的缺点
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Bio …
阅读更多 »贴还是不贴——美国转基因标识风波
在美国,关于转基因食品的争论主要集中在是否要标识上。关于禁止各州强制标识转基因食品的法案,日前获得美国国会众议院通过,迈过了最终成为法律的关键第二步。然而,贴还是不贴,美国转基因标识风波仍未结束。 距离新法还有两步 日前,美国众议院以275票支持、150票反对通过《安全准确的食品标签法案》。根据这一法案,食品企业可不标注产品是否含有转基因成分,不遵循美国某些 …
阅读更多 »细胞转染实验效率低的原因是什么?
细胞转染效率低的原因可从以下几方面找: 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策:用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策:对大多数细胞而言,质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3,一般要做优化实验,比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策:用好的质粒纯化试剂确保质粒 …
阅读更多 »你会正确使用超净台吗?
超净工作台(clean bench)是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。超净工作台原理是在特定的空间内,室内空气经预过滤器初滤,由小型离心风机压入静压箱,再经空气高效过滤器二级过滤,从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的和均匀的断面风速,可以排除工作区原来的空气,将尘埃颗粒和生物颗粒带走,以形 …
阅读更多 »CCK8能否检测细菌细胞?
CCK8试剂盒可以检测E.coli,但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli 培养液中加入10μl CCK8 溶液,并培养1-4 个小时或过夜。 如需了解更多关于CCK8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »我的western-blot实验经验总结
我做了很久的WB,最大的一个难点感觉在于样品制备上!蛋白的降解有些时候是你想象不到的,可能出奇的糟糕,也可能完全没事~~如果单独做WB的话,感觉以“快速彻底裂解,先变性后保存”的原则比较有效,尽量选择足够强的裂解液,甚至直接给loading buffer裂解,然后取出部分蛋白定量,其余加入loading buffer100度充分变性,再分装保存。有些 …
阅读更多 »CCK8实验中,一个孔中应接种多少个细胞?
当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔(100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK8 溶液。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击h …
阅读更多 »实验Figure的制作中需要注意哪几点?
统计图(Figure)是用图形将统计资料形象化,利用线条高低、面积大小代表数量,通俗易懂,比文本与统计表更便于理解和比较。 在科技论文中,应根据资料的类型及表达目的选用合适的统计图。例如,对不同性质分组资料进行对比时可选用直条图,说明事物各组成部分的构成情况可用圆形图或百分直条图,用于表达连续性资料频数分布可用直方图,为表明一事物随另一事物而变化的情况选用线 …
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