英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …
阅读更多 »电转染实验时，DNA有什么要求？
使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素，OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA，因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围为1-5 mg/ml。使用浓度较高的DNA可能会导致与细胞不均匀 …
阅读更多 »贴还是不贴——美国转基因标识风波
在美国，关于转基因食品的争论主要集中在是否要标识上。关于禁止各州强制标识转基因食品的法案，日前获得美国国会众议院通过，迈过了最终成为法律的关键第二步。然而，贴还是不贴，美国转基因标识风波仍未结束。 距离新法还有两步 日前，美国众议院以２７５票支持、１５０票反对通过《安全准确的食品标签法案》。根据这一法案，食品企业可不标注产品是否含有转基因成分，不遵循美国某些 …
阅读更多 »siRNA转染时细胞铺板密度为什么很重要？
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度（汇合度），顺便说一句，看一个转染试剂的 …
阅读更多 »如何做好siRNA细胞转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »电转染实验需要注意的事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞的选择 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代 …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染操作步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μ …
阅读更多 »western-blot实验要点
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loading buffer100度充分变性，再分装保存。有些时候比蛋 …
阅读更多 »CCK8与LncRNA NR2F1‐AS1和甲状腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡研究
甲状腺癌（TC）是全球最常见的内分泌恶性肿瘤，约占头颈部恶性肿瘤的三分之一。近几十年来，全球甲状腺癌发病率和死亡率不断上升，有大量的危险因素与TC的发生和发展密切相关，如遗传因素、环境暴露和表观遗传改变等。尽管在检测和手术管理方面有所改进，包括手术切除、放射治疗和左甲状腺素治疗，但仍有更多的最佳疗法有待进一步发展。因此，揭示TC进展的潜在机制和 …
阅读更多 »硫酸铵饱和度的常见表
1.调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃） 2.调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃） 3.硫酸铵饱和溶液
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