2025年 1 月 18日, 星期六
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标记基因,报告基因知多少?

标记基因,报告基因,傻傻分不清楚?内行人看门道,外行看热闹。专业内的人不知道真的是要被搞哭了。我之前也是不懂,了解了以后就有种豁然开朗了的感觉。 什么是标记基因?什么是报告基因? 标记基因(marker gene)是一种能够起特异性标记作用的基因。其实就是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标 …

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悬浮细胞为什么不容易转染?

      悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。      目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周 …

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RNA转染实验注意事项

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …

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RNA转染与启动子相关的小双链RNA激活研究

最近的一些报道表明,与启动子区互补的小激活dsRNA [双链RNA;SaRNA(小激活dsRNA)]可以上调哺乳动物细胞中的基因表达,这种现象被称为RNAa(RNA激活)。然而,关于什么是启动子靶向SARNA的靶分子,以及参与该过程的蛋白质是什么等RNAa的分子机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与启动子相关的小双链RNA激活研究的文献 …

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细胞增殖-毒性检测实验步骤

CCK8试剂盒,是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例,简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤 方法/步骤 在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 …

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如何解决悬浮细胞转染难题?

      悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。     目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞 …

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细胞转染实验方法有哪些?

1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年,此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …

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细胞增殖-毒性检测实验操作步骤

CCK8试剂盒,是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例,简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤 方法/步骤 1.        在96孔板中配 …

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