为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »如何达到较高的RNA转染效率?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »siRNA转染(engreen)与树突状细胞的表观遗传修饰研究
根据不同的环境,树突状细胞(DC)可能变现为活跃或耐受性,但表观遗传修饰是否参与这些过程鲜为人知。现分享一篇siRNA转染(Entranster-R4000)与树突状细胞的表观遗传修饰研究的文献,显示表观遗传修饰可以调节人体单核细胞来源的DCs(DC)分化为活性或耐受DC。
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与骨髓细胞分化研究
免疫细胞系的规范和功能受祖细胞起源和环境因素的影响。免疫细胞如中性粒细胞、单核细胞和髓系抑制因子,其在炎症环境中的分化机制尚未完全阐明。现分享一篇RNA转染miRNA(Entranster)与骨髓细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量(表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞, 转染试剂和siRNA (或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与肠黏膜屏障的信号转导和细菌移位研究
肠上皮表面由一层柱状上皮细胞构成,形成一个与大多数管腔内细菌直接接触的屏障,在防止细菌易位中起着重要作用。肠上皮屏障功能在炎症性肠病(IBD)的发病机制中起着至关重要的作用,但其机制尚未完全阐明。现分享一篇RNA转染(Entranster)与肠黏膜屏障的信号转导和细菌移位研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA细胞转染实验影响因素
转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA …
阅读更多 »siRNA转染(Entranster)与YWK-II蛋白/APLP2稳定性研究
YWK-II蛋白/APLP2是一种进化上保守的蛋白家族的成员,包括淀粉样前体蛋白(APP)和淀粉样蛋白前体蛋白(APLP1)。已经表明YWK-II /APLP2在细胞存活方面可作为Müllerian抑制物(MIS)的一种新的G蛋白偶联受体。然而,调节YWK-II /APLP2蛋白的折叠和稳定性的因素尚未确定。现分享一篇siRNA转染(Entra …
阅读更多 »RNA转染与膝关节骨性关节炎中WISP-1调控机制的研究
随着生活、工作方式的改变及社会人口的老龄化,骨关节退行性病变已成为高发疾病,其中代表性疾病之一为骨性关节炎(osteoarthritis, OA)。最近研究表明:WISP-1 具有促进关节软骨破坏的作用 。WISP-1 在正常软骨和滑膜中几乎不表达,而在退变的软骨及滑膜(如OA)中WISP-1异常增高,通 …
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