4:Western Blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很浓怎么办? 对ECL发光来说,可以减少发光时间和显影时间。对英格恩Enlight发光液来说,可以将压过的膜重新用TBST洗涤10min×3次后重新曝光操作。 5:Western blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很弱怎么办? 对ECL发光来说,可适当延长曝光时间。如果还是不行,增加蛋白的上样 …
阅读更多 »体内转染与TMUB1通过抑制Stat3磷酸化负调节肝再生研究
肝脏具有显著的再生能力。肝损伤或部分肝切除后,正常肝细胞重新进入细胞周期并增殖以恢复原肝体积、质量和功能。尽管肝脏具有强大的再生能力,但每年有近100万人死亡与慢性肝衰竭有关,这表明在这些病例中,肝再生不足以弥补肝细胞的损失或恢复肝功能。 TMUB1(transmembrane and ubiquitin-like domain-containing 1)在 …
阅读更多 »如何评估体内转染实验的效率?
运用体内试剂Entranster进行体内转染实验后,针对具体的组织器官,不同的注射方法会明显影响效果。比如,大脑神经细胞的体内转染,可以采用尾静脉注射和侧脑室注射,用侧脑室的方法就好得多。再比如,肺部的体内转染,用气管灌注就比用尾静脉注射的方法好得多。体内转染试剂和核酸的混合物与靶器官的接触越直接越充分,效果越好。干扰效率可以理解为干扰的细胞数量和全部细胞的 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究
脑内出血(intracerebral hemorrhage,ich)可引起有效的氧化应激反应和炎症过程,异甘草素(isoliquiritigenin)是一种类黄酮物质,可以激活核因子e2相关因子2(nrf2)介导的抗氧化系统,负调控核因子b(nf-κbκκ)和nod受体家族。现分享一篇体内转染(entranster)与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究的文献,以供 …
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那 …
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到,怎么导入动物呢?他们想到了用英格恩动物体内转染试剂,将mimics与体内转染试剂混合后,尾静脉注射小鼠,几天后就可以观察结果,进行PCR,病理等研究,结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变,从而导致多发 …
阅读更多 »如何达到更好的siRNA转染效率?
为了达到高的转染效率,在转染实验过程中,需要注意以下几点: 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »动物体内转染注射技巧
尾静脉注射时请掌握注射技巧,一般选用远端1/3 处静脉注射,如感觉到阻力和轻微隆起,请停止注射,重新寻找静脉进行操作,不要强力推注,否则容易将药液注射在尾部,导致尾部溃烂。注射完成后移去针头,按压针孔10 秒以上,防止药液流出。局部注射,尽可能多注射药液,有利于提高转染效果 …
阅读更多 »shRNA转染后,什么时候做RT-PCR最好?
shRNA转染后,进行RT-PCR的最佳时间取决于多种因素,包括细胞类型、转染效率、shRNA的表达和目标基因的降解速度。一般来说,在转染后的24到72小时内进行RT-PCR是比较常见的时间点。具体来说: 24小时后:在这个时间点,可以开始检测到shRNA的表达以及目标基因的初步下调情况。对于一些高效的shRNA,这个时间点可能已经有显著的基因沉默效果。 4 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与CREB1基因沉默对血管性痴呆小鼠认知功能障碍的影响研究
血管性痴呆(VD)是老年痴呆的第二大病因,仅次于阿尔茨海默病(AD),在西方国家占所有痴呆病例的17.6%,研究表明在世界东部地区,包括中国和日本人口中,认知功能障碍的人数要更多。认知功能障碍广泛被认为是痴呆患者的经典特征。VD,以各种脑血管疾病为特征的损伤综合征主要与缺血性脑血管疾病相关。目前,VD的确切发病机制仍不清楚。因此,有必要更详细 …
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