英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
去分化软骨肉瘤（DDCs）是一种特殊类型的肉瘤，约占传统软骨肉瘤（CCS）的10%～15%。DDCs是一种由两种不同成分组成的肿瘤，一种与低级别CCS相邻的恶性肿瘤，两部分之间有清晰的边界。由于早期转移而对化疗缺乏反应，DDCS预后差，5年生存率仅为10%～24%。因此，迫切需要探索 …
阅读更多 »siRNA转染进细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »体内转染（engreen）与骨关节炎软骨细胞凋亡研究
骨性关节炎（OA）是一种退行性关节疾病，其特征是软骨破坏、关节边缘骨赘形成（骨赘）、软骨下骨硬化、关节囊改变，以及滑膜的炎症等。OA是关节炎最常见的形式，是老年人疼痛和残疾的主要原因，OA对女性的影响比男性大。OA患者最常见的症状是关节疼痛和僵硬，其他症状可能包括关节肿胀、四肢无力和麻木及运动范围减小等。现 …
阅读更多 »DNA转染与人IL-37b 基因真核表达载体的构建与表达研究
ＩＬ-３７基因位于人类第二号染色体上，共有五种不同的剪切亚型，即ＩＬ-３７ａ ～ｅ，其中ＩＬ-３７ｂ 是五种亚型中分子量最大的一个 。ＩＬ-３７ 具有广泛的炎症抑制作用，可抑制外周血单个核细胞、树突状细胞、巨噬细胞及上皮细胞等细胞炎症因子的产生 ，另外在感染性休克、系统性红斑狼疮、炎症性肠病、肝损伤、肝癌等疾 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因有哪些？
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »CCK8试剂盒工作原理是什么？
CCK8基于水溶性四唑盐WST8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），WST8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜染料（formazan）。甲臜染料能够溶解在组织培养基中，与活细胞数量成正比。通过比色，可以动态地量化活细胞的数量，从而对细胞增 …
阅读更多 »细胞DNA转染实验影响因素
1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 还有，尽量选择无 …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA中，怎么知道mRNA的靶区域在哪
在体外转录法制备dsRNA（双链RNA）的过程中，确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤，以帮助确定mRNA的靶区域： 1. 目标基因的选择 首先，确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息（通常从基因数据库中获得，如NCBI）。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA（siRNA）或小发夹RNA（s …
阅读更多 »RNA转染实验的影响因素
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2. &n …
阅读更多 »RNA转染（entranster）后沉默现象不明显怎么办？
可能原因： 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA，并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果，在蛋白水 …
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