英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
使用Entranster体内试剂转染核酸时，如果通过尾静脉注射，确实不同组织的分布有差异。一般来说，肝、肺、肾的分布最高。一般分布高的地方转染效率也相对较高。但不是其他的组织器官效果就不好，相反，对绝大多数的器官组织来说，采用体内转染技术，效果也很好。比如一般认为神经细胞难以转染，而且尾静脉动物给药，通过血 …
阅读更多 »siRNA转染过程中常见问题及解答
1.RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转 …
阅读更多 »体内转染与神经元损伤和血脑屏障破坏研究
脑内出血（Intracerebral hemorrhage，ICH），占中风原因的10% – 15%，是以脑内一条或多条血管破裂和血液进入脑实质为特点。脑出血后血肿导致脑组织受压，导致机械性损伤和继发性脑损伤，以及炎症反应、神经细胞死亡和神经功能缺损。ICH发病率上升，住院率增加18%。大约20 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与纳米羟基磷灰石调控成骨细胞分化研究
羟基磷灰石（HAP）在骨骼形成和骨重塑中起着重要作用。合成HAP与自然形成的HAP相似，已广泛应用于骨科和牙科植入。尽管纳米HAP在高浓度下容易聚集，但分散的纳米HAP在成骨细胞分化中的细胞内命运和作用机制仍有待充分阐明。现分享一篇ECL发光液（enlight）与纳米羟基磷灰石调控成骨细胞分化研究的文献，以供参考。
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与SIRT3基因和非酒精性脂肪肝病研究
作为一种正在全世界蔓延的慢性复杂性疾病，非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）发病率在全球范围内的攀升迅速，被称为“下一场即将到来的世界性疾病大流行”。NAFLD有发展为肝硬化甚至肝癌的风险，对人类健康造成严重威胁。 Sirtuins是一类NAD＋依赖的去乙酰化酶。SIRT3是该家族 …
阅读更多 »病毒载体的基本元件
反转录病毒载体 最常用的反转录病毒载体基于Mo -MLV 。第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR, 由增强子(U3) 、R 区（即转录起始区，在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在）及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列（ψ）介导，而邻近的gag序列能够显著提高其包装效率。所有反转录病毒载体均携带一个ψ甲序列和部分gag 序列组成的扩展包 …
阅读更多 »RNA转染与骨形态发生蛋白-2调控PMVECs的肌源性分化研究
肝功能不全和肝硬化影响多种器官系统的脉管系统，导致器官功能受损，导致发病率和死亡率增加。肝肺综合征（HPS）是一种发生在肝硬化晚期的肺微血管疾病，加重原发性肝脏疾病，并引起多种相关并发症。由于HPS在全球范围内受到越来越多的关注，在过去几十年中，HPS的病理研究取得了进展。然而，HPS的病理生理机制尚未确定。 …
阅读更多 »RNA转染效率低的原因是什么？
RNA转染效率低，可能的原因： · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »转导细胞的检测分析
1. 制备载体储备液。 2. 以每个靶细胞不同的MOI 或载体剂量转导靶细胞。 腺病毒载体： 100~ 10 000 个病毒颗粒／靶细胞。腺相关病毒载体： 10 000~ 100 000 个病毒基因组／靶细胞。慢病毒载体： MOI5 ~ 500 。 3 在转导后3 ~ 5 天对转入基因的表达进行评价。 对于载体编码蛋白质，有多种方法可用来评价转导细胞中转入基 …
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