腺相关病毒(AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒,无包膜,直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒,因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒,如腺病毒共感染时,它的天然复制能力缺失,与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »腺病毒实验常见问题
1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求? 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体,比如AdMax的Kit C、Kit D等,其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体,比如Kit A、Kit B等,外源片断要求小于5 kb。注意,外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性? 提高 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒,,可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
阅读更多 »慢病毒感染后,细胞不生长怎么办
慢病毒感染后,细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法: 病毒滴度过高: 原因:高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性,使细胞无法正常生长。 解决方法:降低病毒的滴度,进行一系列稀释实验,找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳: 原因:感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法:确保细胞在最佳状态下进行感染,例如在感染前 …
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