细胞生物学

1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×10^6-4×10^6细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

       一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …

使用腺相关病毒（AAV）进行大脑转染是一种常用的基因传递方法，具有较高的特异性和安全性，但在实际操作中也会面临一些问题。以下是一些常见的问题及其解决方案： 转染效率问题： 选择合适的AAV血清型：不同的AAV血清型对不同类型的神经元和大脑区域具有不同的亲和力。选择合适的血清型可以显著提高转染效率。 病毒滴度：确保使用足够高滴度的AAV病毒，但要避免过高的滴度 …

体外培养细胞的能量代谢 体外培养细胞的主要能量来自葡萄糖。大多数培养液含1 g/L (5.55mmol/L)葡萄糖， 近年来含4.5g/L 葡萄糖的高糖培养液（主要是DMEM 和RPMil640 ) 使用得越来越多。这使得细胞增殖更快。葡萄糖主要被细胞用作糖酵解的碳源，以乳酸为终产物。培养细胞中三狻酸循环（也称拧檬酸循环）仍然活跃，氨基酸作为碳源，特别是谷氨 …

1．选择合适的转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …

已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …

是的，藻类细胞和动物细胞电转所用的仪器通常有一些区别。具体来说，电转仪器的选择和设置参数会因细胞类型的不同而有所不同，以下是一些主要的差异： 1. 电转仪器的类型 藻类细胞通常会选择高压短时脉冲电转仪，因为藻类细胞多有细胞壁，且结构较坚硬，需要较高的电压来突破细胞壁，使 DNA 进入细胞。 动物细胞（尤其是哺乳动物细胞）一般选择低压长时脉冲电转仪，因动物细胞 …

1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …

siRNA转染效率不理想，常见的原因有：1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总 …