2025年 5 月 7日, 星期三
新闻

细胞转染

纳米材料转染试剂(Entranster)优势研究

        纳米材料转染试剂由纳米高分子聚合物组成,分子内含有许多氨基,在生理PH下会发生质子化,这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面 的负电荷,使DNA  分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA  转移进入细胞,形成内含体(endosome),DNA从内含体释放, …

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细胞转染效率影响因素

         转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。影响转染效率的因素有很多,细胞株本身的特性和活性,细胞培养条件,转染的DNA或RNA的质量,转染方法,转染 …

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RNA转染效率低的原因是什么?

RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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如何选择慢病毒和腺病毒系统?

慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …

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siRNA转染后出现细胞死亡是什么原因?

      转染后细胞死亡,原因也是多样的,如脂质体毒性,转染浓度过高,转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生,这种情况下就需要适当优化转染条件;可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂,如Entranster试剂,另外,如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的,出现细胞死亡的现象可能正 …

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如何优化细胞RNA转染实验条件?

可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …

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可否使用慢病毒滴度测定方法来测定AAV(腺相关病毒)的滴度

一般来说,这种慢病毒滴度测定方法不适用于测定AAV(腺相关病毒)的滴度。原因如下: 病毒特性不同:慢病毒和AAV的结构、感染机制不同。慢病毒是逆转录病毒,而AAV是一种非整合的单链DNA病毒,两者的感染和表达方式差异较大。慢病毒的滴度通常通过转染宿主细胞后观察其表达水平来测定,而AAV通常使用其他方法。 检测方法的差异:AAV的滴度检测通常使用qPCR(定量 …

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哺乳动物细胞同时表达2个质粒,如果采用相同的启动子,会不会形成表达竞争

是的,如果哺乳动物细胞同时表达两个质粒,且这两个质粒使用相同的启动子,它们可能会发生表达竞争(expression competition)。这种情况通常会影响两个质粒上基因的表达水平,具体影响程度取决于多个因素。 原因 转录因子的竞争: 启动子区域的转录因子结合位点是有限的。如果两个质粒使用相同的启动子,它们可能会争夺同一批转录因子。这种竞争会导致转录因子 …

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siRNA转染实验需要知道的关键点

1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …

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影响RNA转染实验的因素有哪些?

1.   转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. 2.  RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试 …

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